一、校正前準備工作
全自動薄層色譜成像系統開機預熱 15~20 分鐘,紫外、白光、熒光各光源充分穩定,避免光源功率波動造成底色偏色。
清理成像暗箱,擦除臺面污漬、薄層板殘留試劑,無粉塵、無揮發色素殘留,防止背景雜色干擾校正基準。
取出原廠標準校正白板,確認板面潔凈無劃痕、無發黃變色,破損白板會直接導致校正失效。
關閉環境強光、窗簾遮光,杜絕外部光線滲入暗箱引發圖像色差偏移。
二、基準白板校正流程(基礎色差校準)
將標準校正白板平整放置于薄層板載物臺中心,壓緊固定,保證板面與鏡頭垂直無傾斜。
進入設備軟件校正界面,選擇白平衡校正模式,依次切換 254nm、365nm 紫外光、可見光通道。
啟動自動采集,設備自動采集白板基準圖像,系統自動計算紅、綠、藍三色通道補償參數并保存。
單次校正完成后重新采集白板圖像,查看畫面是否純白無偏黃、偏藍、偏紅,存在色差則重復校正一次。
三、薄層背景色差補償校正
取空白未點樣、未展開的空白薄層板,平鋪于載物臺,去除板面灰塵。
切換對應檢測光源,采集空白薄層板背景圖,執行背景底色補償功能。
軟件自動扣除硅膠基質自帶黃、灰底色,消除硅膠材質本身帶來的整體圖像偏色,保存補償參數。
更換不同品牌薄層板后,必須重新執行本步驟,不同硅膠底色差異會產生色差。
四、斑點顯色色差修正步驟
選取含標準對照斑點的質控薄層板,正常點樣、展開、顯色后上機成像。
采集完整色譜圖像,打開色彩調節面板,微調 RGB 增益、伽馬值,保證斑點顏色與肉眼觀察一致。
對比標準色卡,校正斑點明暗色差,避免熒光斑點過藍、有色斑點偏紅失真。
參數調整完成后保存專屬顯色校正方案,后續同類型樣品直接調用。
五、鏡頭與光路色差定期校準
每月清潔鏡頭鏡片,用無塵擦鏡紙蘸取無水乙醇輕擦,去除霧漬、色素殘留,鏡片臟污會出現邊緣色差。
檢查光源燈管老化程度,燈管衰減會出現整體畫面偏暗、單色缺失,老化燈管及時更換后重新全套校正。
校正載物臺水平,臺面傾斜會造成畫面左右、上下色彩明暗不均,調平后重復白平衡校正。
六、校正后驗證與保存
校正完畢,連續采集白板、空白薄層板、標準斑點板三張圖像,核對無偏色、無色塊色差。
將整套校正參數命名存檔,區分紫外、白光、熒光不同檢測模式,方便一鍵調取。
記錄校正時間,設備更換光源、鏡頭、清潔暗箱后,均需完整重做全套色差校正。
七、色差校正常見問題
圖像整體偏黃:白板老化或光源紫外衰減,更換白板 / 燈管后重新白平衡。
畫面左右色彩不一:載物臺不平、鏡頭臟污,調平臺面并清潔光路。
斑點顏色失真:未做薄層底色補償,執行空白板背景校正。
校正后短期再次色差:暗箱漏光,密閉遮光后重新校準。
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