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Pronase E

MCE 國際站：Pronase E (Activity ≥ 7000 U/g)

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-114158

CAS：9036-06-0

Synonyms：Pronase (Activity ≥ 7000 U/g

存儲條件：請按照分析證書中建議的條件儲存產(chǎn)品。

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產(chǎn)品活性：Pronase E (Activity ≥ 7000 U/g) 是從灰色鏈霉菌 (Streptomyces griseus) 中獲得的一種蛋白水解酶混合物，能夠?qū)⒌鞍踪|(zhì)消化成單個氨基酸。

生物活性：Pronase E（活性 ≥ 7000 U/g）是從 Streptomyces griseus 中獲得的蛋白水解酶的混合物，可以將蛋白質(zhì)消化成單個氨基酸^[1]。

體外：Pronase E 顯著增加了所分析的大多數(shù)氨基酸的量 (PE 與 C)，尤其是 Ile、His 和 Thr[1]。 Pronase E 使用步驟：1. 儲備液的制備： (1) 將 Pronase E 溶解于去離子水中，配制成 5-20 mg/ml 的儲備液。 注：如用于 DNA 或 RNA 分離步驟，建議先將溶液在 56°C 下加熱 15 分鐘。(2) 在 37°C 下孵育 1 小時。將制備好的儲備液分裝為一次性等分試樣，存儲于 -20°C，通常可穩(wěn)定保存一年。 2. DNA 分離： 直接將 Pronase E 添加到 DNA 制備系統(tǒng)中。制備系統(tǒng)應(yīng)含有 0.5-1% 的 SDS，以破壞 DNA 與蛋白質(zhì)的相互作用。注：使用濃度 250-500 μg 蛋白質(zhì)/mL。孵育條件：37°C 下孵育 1-4 小時。 3. 蛋白質(zhì)消化：(1) 將大約 0.2 μM 的蛋白質(zhì)溶解在 0.2 ml 的 50 mM 碳酸氫銨緩沖液（pH 8.0）或磷酸鹽緩沖液（pH 7.0）中。 (2) 添加 1%（w/w）的鏈霉蛋白酶 E。在 37°C 下孵育 24 小時，以進行蛋白質(zhì)消化。 MCE尚未獨立證實這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

體內(nèi)：使用 Pronase E 分離小鼠原代造血干細胞 (HSC) 的實驗步驟[2] 1. 動物麻醉與腹腔暴露： (1) 對雄性或雌性小鼠進行麻醉。 (2) 在無菌操作下，通過腹腔切開術(shù)暴露肝臟。 2. 肝臟灌注操作： (1) 使用 Hanks 緩沖鹽溶液（HBSS）從門靜脈對肝臟進行灌注，目的是清除血液和雜質(zhì)。 (2) 進行鏈霉蛋白酶 E 和膠原酶的酶促灌注，以解離肝臟組織。 3. 肝臟提取與細胞釋放： (1) 使用無菌鑷子將肝臟從腹腔內(nèi)輕柔取出，并迅速轉(zhuǎn)移至無菌培養(yǎng)皿中。 (2) 小心剝離肝包膜，通過溫和的機械震蕩促使細胞從肝組織中釋放。 4. 細胞消化與初步離心分離： (1) 將所得細胞懸浮于含有鏈霉蛋白酶 E、膠原酶及 DNase 的混合酶溶液中，并在 37°C 條件下消化 20 分鐘。 (2) 通過兩次低速離心 (50 g，3 分鐘) 分離肝細胞，收集細胞懸液。 5. HSC 的分離與密度梯度離心： (1) 對細胞懸液進行進一步的離心處理（450 g，8 分鐘），收集沉淀部分。 (2) 將沉淀物重新懸浮于 18% 的 Nycodenz 溶液中，作為密度梯度分離的基礎(chǔ)。 (3) 構(gòu)建密度梯度，依次為 12% Nycodenz、8.2% Nycodenz 以及 Gey 平衡鹽溶液 (GBSS)。 (4) 通過密度梯度離心，從 8.2% Nycodenz 層中分離并純化造血干細胞 (HSC)。 注：此方案提供了標(biāo)準(zhǔn)操作流程，實際實驗中請根據(jù)具體實驗需求和條件進行適當(dāng)調(diào)整和優(yōu)化。  MCE尚未獨立證實這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

熱銷產(chǎn)品：Rutin (hydrate)  | A 1120  | Vedolizumab (anti-α4β7-integrin)  | Polymyxin B  | Mosapride (citrate)

Trending products：Recombinant Proteins  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |   Oligonucleotides

參考文獻：
[1]. José M Bruna, et al. Enhancement of the flavour development of dry fermented sausages by using a protease (Pronase E) and a cell‐free extract of Penicillium camemberti. Journal of the science of food and agriculture. Volume82, Issue5. April 2002. Pages 526-533.
[2]. Chen QT, et al. HK1 from hepatic stellate cell-derived extracellular vesicles promotes progression of hepatocellular carcinoma. Nat Metab. 2022 Oct;4(10):1306-1321.