質譜級蛋白酶是指經過特殊純化和質量控制的蛋白酶，其核心特點是在質譜水平檢測蛋白酶的漏切率和專一性，主要用于蛋白質質譜分析前的酶切消化，以提高蛋白質鑒定的準確性和效率。

常見的蛋白酶按質控等級可分為三類：質譜級、測序級、生化級。三者在性能和應用場景上各有側重，它們的區別直接決定了你能做什么實驗。

表 1.不同質控級別產品的區別。

一句話總結：生化級求“有"，測序級求“準"，質譜級求“精且穩"。

自下而上的蛋白質組學流程中，蛋白酶將完整蛋白切割為肽段，再經液相色譜-串聯質譜 (LC-MS/MS) 鑒定。

質譜級胰蛋白酶因其特異性切割賴氨酸 (K) 和精氨酸 (R) 的羧基端，生成長度適中、帶正電荷的肽段，顯著提升電離和解離效率，成為常用工具。更多詳情可參考往期：蛋白組學樣本制備關鍵步驟：酶解 (附 Protocol)。

糖基化會影響蛋?藥物的療效，穩定性和免疫原性。質譜法因其高靈敏度、速度和穩定性成為蛋白質糖基化分析的有力工具。

N-糖分析：常用 PNGase F，能特異性識別天冬酰胺 (Asn) 殘基上的 N-糖，水解其與蛋白質之間的酰胺鍵，釋放出糖鏈并使 Asn 殘基去酰胺化為天冬氨酸 (Asp) 。

O-糖分析：目前缺乏通用的 O-糖酶，多依賴化學法釋放，在溫和條件下高效斷裂 Ser/Thr 上的 O-糖鍵。

 

圖 1. 基于質譜的糖蛋白組學和糖組學的一般策略^[1]。

多屬性方法 (Multi-Attribute Method, 簡稱 MAM) 是一種基于液相色譜-質譜聯用技術 (LC-MS) 的分析方法，廣泛應用于生物醫藥研發和生產中，用于同時識別和定量蛋白類藥物的多種產品質量屬性 (PQA) 或關鍵質量屬性 (CQA)。

MAM 方法已成為生物制藥行業的新標準——它可以直接在肽段水平上監測治療性蛋白藥物的 PQA 和雜質。

MAM 是基于 LC-MS 的肽圖分析方法，流程包括：

(1) 樣品制備，需要變性、還原、烷基化和蛋白酶解，常用蛋白酶包括 Trypsin、Lys-C 等； 

(2) 肽段反相色譜分離，高分辨質譜檢測； 

(3) 數據分析：DDA 數據建立 Spectral Library 目標肽段列表，DIA 數據進行肽段定量分析，旨在與來自參考樣品的數據集相比，檢測來自樣品的數據中未知峰和目標肽。

 

圖 2.MAM 實施流程^[2]。

質譜級蛋白酶這個小能手，在好多地兒都大顯身手，它活性到底有多“頂"？我們以 Endoproteinase Asp-N (HY?E70196) 為例，看看質譜級酶的真實表現！

               

這表明，質譜級蛋白酶不僅活性高，而且每一位切割都精準到位，為下游數據質量打下堅實基礎。

質譜級蛋白酶之所以“不一樣"，核心在于：

? 質譜水平驗證專一性與漏切率
? 極低的自切與非特異背景
? 高批次穩定性，滿足組學與生物藥的嚴苛要求

MCE 可提供多種質譜級蛋白酶，助力您的研究！

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參考文獻

[1] Haojie Lu, et al. Advancements in mass spectrometry-based glycoproteomics and glycomics, National Science Review, Volume 3, Issue 3, September 2016, Pages 345–364.

[2] Silvia Millán-Martín, Comprehensive multi-attribute method workflow for biotherapeutic characterization and current good manufacturing practices testing[J]. Nature Protocols volume 18, pages1056–1089 (2023).