Phorbol 12-myristate 13-acetate

MCE 國(guó)際站：Phorbol 12-myristate 13-acetate

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號(hào)：HY-18739

CAS：16561-29-8

中文名稱：佛波醇12-十四酸酯13-乙酸酯；(12-)十四酸佛波酯(-13-)乙酸鹽；佛波酯

Synonyms：佛波酯; PMA; TPA; Phorbol myristate acetate

純度：99.80%

存儲(chǔ)條件：-20°C, 避光 *溶劑中：-80°C, 6 個(gè)月; -20°C, 1 個(gè)月（避光）

運(yùn)輸條件：美國(guó)大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產(chǎn)品活性：Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一種佛波酯，是蛋白激酶 C (PKC) 和 SphK 的激活劑。Phorbol 12-myristate 13-acetate 是 NF-κB 激活劑。Phorbol 12-myristate 13-acetate 可誘導(dǎo) THP-1 細(xì)胞分化 (已經(jīng)經(jīng)過(guò) MCE 專業(yè)的生物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證)。

生物活性：Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一種佛波醇酯，是一種雙重 SphK 和 蛋白激酶 C (PKC) 激活劑^[1][2]。 Phorbol 12-myristate 13-acetate 是一種 NF-κB 激活劑。 Phorbol 12-myristate 13-acetate 誘導(dǎo) THP-1 細(xì)胞分化^[3][7]。 IC50 和目標(biāo)：EC50：11.7 nM (PKC)^[1] 體外： 為了檢查 PKC 在 p38MAPK 磷酸化中的作用，用 PKC 激活劑 PMA (100 nM) 刺激細(xì)胞，該激活劑模擬 PKC 的天然激活劑 DAG 與 PKC 的 C1 區(qū)的結(jié)合。在兩種細(xì)胞類型中觀察到 PMA 對(duì) p38MAPK 的磷酸化，類似于在 αT3-1 細(xì)胞中觀察到的 GnRH，即緩慢持續(xù)激活（30 分鐘時(shí)分別為 3.2 倍和 3.6 倍）。由 GnRH 和 PMA 激活的 PKCs 在 p38MAPK 磷酸化中發(fā)揮不同作用的矛盾發(fā)現(xiàn)可以用 PKCs 的不同定位來(lái)解釋。 αT3-1 細(xì)胞中 p38MAPK 磷酸化的基礎(chǔ)、GnRH- 和 PMA- 刺激由 Ca²⁺ 通過(guò)電壓門控 Ca²⁺ 通道和 Ca ^{流入介導(dǎo)2+} 動(dòng)員，而在分化的 LβT2 促性腺激素細(xì)胞中，它僅由 Ca²⁺ 動(dòng)員^[2] 介導(dǎo)。
THP-1 細(xì)胞通過(guò)在 PMA（200 ng/mL；1-5 天）存在下孵育分化成巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞（THP-1 巨噬細(xì)胞），從而導(dǎo)致以形態(tài)變化和細(xì)胞表面表達(dá)增加為特征的巨噬細(xì)胞樣表型CD11 和 CD14^[3]。
在單核細(xì)胞系 THP-1 中，根據(jù)粘附、增殖喪失、乳膠珠的吞噬作用，PMA 導(dǎo)致比 VD3 更分化的表型, 以及 CD11b 和 CD14^[5] 的表達(dá)。 體內(nèi)：PMA 是一種 PKC 激動(dòng)劑，可逆轉(zhuǎn) 5-羥基癸酸 (5-HD) 誘導(dǎo)的損傷。因此，mitoKATP 的激活通過(guò) PKC 通路保護(hù)了 SOD 和 MDA 中的線粒體功能^[4]。

體外：PMA (100, 200 ng/mL；1-5 天) 誘導(dǎo) THP-1 細(xì)胞孵育分化成巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞 (THP-1 巨噬細(xì)胞)，從而導(dǎo)致形態(tài)變化，即貼壁樣的巨噬細(xì)胞樣表型，且細(xì)胞表面 CD11b 表達(dá)增加[3][5]。 注意事項(xiàng)： 1. THP-1 傾向于高密度生長(zhǎng)，需要偏高的密度維持較好的細(xì)胞狀態(tài)，一般1:2 半換液或者補(bǔ)液來(lái)傳代，少離心，盡量使用高質(zhì)量血清。 2. 傳代次數(shù)、細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞密度都可能會(huì)影響誘導(dǎo)效果。必要時(shí)請(qǐng)調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)至較好時(shí)開展實(shí)驗(yàn) (細(xì)胞形態(tài)飽滿，大小均一，折光性較好，為懸浮生長(zhǎng)單個(gè)細(xì)胞)。 3. PMA 使用時(shí)請(qǐng)注意避光儲(chǔ)存 ，配成 DMSO 母液后分裝凍存，避免反復(fù)凍融。 4. 如何判斷實(shí)驗(yàn)成功：最直觀的就是細(xì)胞由懸浮生長(zhǎng)變成貼壁生長(zhǎng)。 PMA (20 ng/mL，36 小時(shí)) 通過(guò)激活 PKC-δ/Syk/NF-κB 介導(dǎo)的 Thy-1 上調(diào)來(lái)抑制內(nèi)皮細(xì)胞遷移[8]。 MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

體內(nèi)：Phorbol 12-myristate 13-acetate 可用于動(dòng)物建模，構(gòu)建濕疹樣模型。Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) 是一種 PKC 激動(dòng)劑，可逆轉(zhuǎn) 5-羥基癸酸 (5-HD) 引起的損傷。因此，mitoKATP 的激活通過(guò) PKC 通路保護(hù)了 SOD 和 MDA 中的線粒體功能[4]。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：大鼠[3] 所有實(shí)驗(yàn)均使用雄性Wistar大鼠（體重250~280 g）。將135只Wistar大鼠隨機(jī)分為7組。（1）假手術(shù)組（n=21）大鼠于大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）前30 min向側(cè)腦室注射0.9%生理鹽水；（2）IR組（n=21）大鼠于大腦中動(dòng)脈閉塞（MCAO）前30 min向側(cè)腦室注射0.9%生理鹽水；（3）甘珀酸（CBX）組（n=21）大鼠于MCAO前30 min向側(cè)腦室注射CBX（5 μg/mL×10 μL）； (4)Sch-6783組(n=21)大鼠于MCAO前30 min側(cè)腦室注射DZX(2 mM×30 μL);(5)5-HD組(n=21)大鼠于MCAO前15 min側(cè)腦室注射5-HD(100 mM×10 μL),10 min后注射DZX;(6)DZX+Ro組(n=15)大鼠于MCAO前15 min側(cè)腦室注射DZX,10 min后注射Ro-31-8425(400 μg/kg); （7）5-HD+PMA組（n=15）大鼠在注射5-HD和DZX后，腹腔注射PMA（200μg/kg）。MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：αT3-1 和 LβT-2 細(xì)胞在 37°C 加濕培養(yǎng)箱中以單層形式在 DMEM 中生長(zhǎng)，培養(yǎng)箱中含有 5% CO2。在相同培養(yǎng)基中加入 0.1% FCS 進(jìn)行血清饑餓處理 16 小時(shí)。然后按指示的時(shí)間添加 GnRH 和 PMA。通常，αT3-1 細(xì)胞通過(guò) ExGen 500 或 jetPRIME 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，而 LβT2 細(xì)胞僅通過(guò) jetPRIME 轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染。對(duì)于顯性負(fù)性 (DN) PKC 實(shí)驗(yàn)，αT3-1 細(xì)胞（在 6 厘米板中）用 1.5 μg p38α-GFP 和 3 μg 對(duì)照載體 pCDNA3 或 3 μg DN-PKC 構(gòu)建體轉(zhuǎn)染。對(duì)于 LβT2 細(xì)胞，轉(zhuǎn)染是在 10 cm 板中使用 4 μg p38α-GFP 和 9 μg 對(duì)照載體 pCDNA3 或 9 μg DN-PKCs 構(gòu)建體進(jìn)行的。轉(zhuǎn)染后約 30 小時(shí)，將細(xì)胞置于血清饑餓狀態(tài)（0.1% FCS）16 小時(shí)，然后用 GnRH 或 PMA 刺激，用冰冷 PBS 清洗兩次，用裂解緩沖液處理，然后進(jìn)行一次凍融循環(huán)。收獲細(xì)胞；離心（15,000×g，15 分鐘，4°C）后取上清液進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)[2]。MCE 尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。它們僅供參考。

IC50 & Target：PKC 11.7 nM (EC50) NF-κB

熱銷產(chǎn)品：Fostamatinib (disodium hexahydrate)  | USP7-IN-9  | Cediranib  | Hardwickiic acid  | Rutin  | Cyanine5.5 amine  | NSC 228155  | YD23  | Mycophenolic acid  | Bavituximab

Trending products：Recombinant Proteins  |  Natural Products  |  Fluorescent Dye  |  PROTAC  |  Oligonucleotides

參考文獻(xiàn)：

[1]. Sergio E. Alvarez, et al. Autocrine and paracrine roles of sphingosine-1-phosphate. TRENDS in Endocrinology and Metabolism Vol.18 No.8
[2]. Mugami S, et al. Differential roles of PKC isoforms (PKCs) and Ca2+ in GnRH and phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) stimulation of p38MAPK phosphorylation in immortalized gonadotrope cells. Mol Cell Endocrinol. 2017 Jan 5;439:141-154.
[3]. Hou S, et al. Mechanism of Mitochondrial Connexin43's Protection of the Neurovascular Unit under Acute Cerebral Ischemia-Reperfusion Injury. Int J Mol Sci. 2016 May 5;17(5). pii: E679.
[4]. Zhang T, et al. MPTP-Induced Depletion in Basolateral Amygdala via Decrease of D2R Activation Suppresses GABAA Receptors Expression and LTD Induction Leading to Anxiety-Like Behaviors. Front Mol Neurosci. 2017 Aug 7;10:247.
[5]. Schwende H, et al. Differences in the state of differentiation of THP-1 cells induced by phorbol ester and 1,25-dihydroxyvitamin D3. J Leukoc Biol. 1996;59(4):555-561.
[6]. Starr T, et al. The phorbol 12-myristate-13-acetate differentiation protocol is critical to the interaction of THP-1 macrophages with Salmonella Typhimurium. PLoS One. 2018;13(3):e0193601. Published 2018 Mar 14.
[7]. Heng-Ching Wen, et al. PMA inhibits endothelial cell migration through activating the PKC-δ/Syk/NF-κB-mediated up-regulation of Thy-1. Sci Rep. 2018 Nov 2;8(1):16247.