MCE 國際站：D-Luciferin potassium

品牌：MedChemExpress (MCE)

貨號：HY-12591B

CAS：115144-35-9

中文名稱：D-螢光素鉀鹽

Synonyms：D-熒光素鉀鹽; D-(--Luciferin potassium; Firefly luciferin potassium; Beetle Luciferin potassium

純度：99.97%

存儲條件：4°C，密封保存，避光防潮 *溶劑中：-80°C，2年；-20°C，1年（密封保存，避光防潮）

運輸條件：美國大陸的室溫；其他地方可能有所不同。

產品活性：D-Luciferin 是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，對螢火蟲產生典型的黃綠光進行催化。該反應產生的 560 nm 化學發光在幾秒鐘內達到峰值，當底物熒光素過量時，光輸出與熒光素酶濃度成正比。熒光素酶 (luc) 基因是研究和活性分子篩選的常用報告基因。化學發光技術實際上是無背景的，使得 luc 報告基因成為檢測低水平基因表達的理想選擇。在標準熒光計數儀中可以可靠地測量到 0.02 pg 的熒光素酶。除了用于基因表達的外，熒光素酶還用于 ATP 的檢測。MCE提供螢火蟲熒光素酶 (HY-P1004) 、熒光素游離酸 (HY-12591A) 及其水溶性鈉鹽 (HY-12591) 和鉀鹽 (HY-12591B) 。

生物活性：D-熒光素 (D-(-)-Luciferin) potassium 是熒光素酶的底物，可催化生物發光昆蟲產生光^[1]。 體外 D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲典型黃綠光的產生。本綜述涵蓋了合成D-螢光素及其衍生物或類似物，它們是來自美國螢火蟲 Photinus pyralis 的螢光素酶的底物或抑制劑，這種酶更常用于體外和光學成像技術^{[1]< /sup>.
D-螢光素在 PC3M-Luc 細胞裂解物中顯示出測量的 K_m 降低，K_m 為 34 μM[ 2]。 體內：生物發光成像 (BLI) 使用螢火蟲熒光素酶 (Fluc) 作為報告基因，D-熒光素作為底物。將總信號強度與 D-熒光素注射后的時間作圖，以生成時間-強度曲線。除了峰值信號外，D-熒光素注射后固定時間點（5、10、15 和 20 分鐘）的信號被確定為峰值信號的替代信號。給定時間-強度曲線中的信號針對曲線中的峰值信號進行歸一化，以表示 D-熒光素注射后的時間變化模式[3]。
注入 10 μL每克體重的 D-螢光素（腹膜內或靜脈內）儲備液：標準 150 mg/kg 注射的 20 g 小鼠通常約 200 μL。
解凍 D-螢光素（鉀鹽或鈉鹽）室溫并溶解在 dPBS（不含鈣或鎂）中，最終濃度為 15 mg/mL。通過 5-10 mL 的無菌 H₂O 預濕 0.22 μm 過濾器并丟棄水。通過準備好的 0.22 μm 注射器過濾器對 D-熒光素溶液進行消毒。}

體外：1. 操作前注意事項a) D-Luciferin 在 100 mM 的水性緩沖液 (pH 6.1-6.5) 中易于溶解。儲備溶液可在不含 ATP 的水中制成，并儲存在 -20℃ 的溫度下，以防光線照射。游離酸必須用適當的堿中和以溶解。在較高的 pH 值下，熒光素經歷堿催化的脫氫脲醛生成，以及外消旋成L-異構體。b) D-Luciferin 可用于任何現有的報告基因檢測或 ATP 檢測系統。c) 如果檢測 ATP，需要戴手套和使用不含 ATP 的容器，盡量減少所有可能的 ATP 污染源。只使用無菌的不含 ATP 的水和試劑。所有試劑制劑使用蒸壓水。2. 實驗操作此說明僅提供實驗參考，具體實驗方法根據您的具體實驗進行更改。2.1 體外成像實驗示例a) 在無菌水中制備100 mM (100-200X) 熒光素儲備溶液 拌勻。立即使用或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲存，避免凍融循環，避免暴露在陽光下。b) 在預熱過的組織培養液中配制 0.5-1 mM D-Luciferin 工作液c) 除去細胞中的培養基。d) 在細胞中加入 D-Luciferin 工作液，成像前 37℃ 孵育細胞 5-10 分鐘。2.2 體內成像實驗示例a) 在 DPBS 中制備 15 mg/mL 熒光素儲備溶液，不含 Mg2+ 和 Ca2+ 拌勻。b) 過濾器通過 0.2μm 過濾器對溶液進行滅菌。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲存，避免凍融循環，避免暴露在陽光下。c) 成像15 分鐘，以 150 mg/kg (或 10 μL/g 熒光素儲備溶液) 的動物體重腹腔注射 D-Luciferin。注：應為每個動物模型進行 D-Luciferin 動力學研究，以確定峰值信號時間。2.3 基因檢測實驗示例a) 在無菌水中制備100 mM 熒光素儲備溶液。立即使用，或一次性等份使用，并在 -20℃ 下儲存，避免凍融循環，避免暴露在陽光下。b) 在 25 mM tricine 緩沖液 (pH 7.8) 中制備含有 3 mM ATP、1 mM DTT 和 15 mM MgSO4 的 1 mM D-Luciferin 工作溶液。c) 用移液管將 5-10 μL 細胞裂解液移到微孔板中。使用不含裂解物的裂解試劑或緩沖液作為空白對照。d) 根據說明，使用熒光素工作溶液為光度計注入底部。e) 立即注入 200 μL D-Luciferin工作溶液，結合時間為10秒。 MCE尚未獨立證實這些方法的準確性。僅供參考。

體內：生物發光成像 (BLI) 使用螢火蟲熒光素酶 (Fluc) 作為報告基因，D-熒光素作為底物。將總信號強度與注射 D-熒光素后的時間作圖，以生成時間-強度曲線。除了峰值信號之外，注射 D-熒光素后固定時間點 (5、10、15 和 20 分鐘) 的信號也被確定為峰值信號的替代。給定時間-強度曲線中的信號根據曲線中的峰值信號進行歸一化，以表示注射 D-熒光素后的時間變化模式[3]。每克體重注射 10 μL D-熒光素 (腹膜內或靜脈內) 原液：標準 150 mg/kg 注射液，20 克小鼠通常注射約 200 μL。在室溫下解凍 D-熒光素（鉀鹽或鈉鹽），并溶解在 dPBS（不含鈣或鎂）中，最終濃度為 15 mg/mL。通過 5-10 mL 無菌 H2O 預濕 0.22 μm 過濾器并棄水。通過準備好的 0.22 μm 注射器過濾器對 D-熒光素溶液進行滅菌。MCE 尚未獨立確認這些方法的準確性。它們僅供參考。

動物實驗：小鼠[2] 在接種 HCT116-Luc 細胞后 3、5、7、10、12、14、19、21、24 和 28 天，使用冷卻電荷耦合器件攝像系統 (IVIS 成像系統 100) 進行體內 BLI。小鼠皮下注射 100 μL 磷酸鹽緩沖鹽水中的 75 mg/kg D-熒光素。注射后 5 分鐘開始，以每分鐘一張的速度連續獲取曝光時間為 1 秒的背部發光圖像，直至注射 D-熒光素后 20 分鐘。由于光發射的時間過程延長，數據采集持續到第 3 天或第 5 天的注射后 40 分鐘以及第 7 天的 25 分鐘。Binning 為 4，視野為 15 厘米。MCE 尚未獨立證實這些方法的準確性。它們僅供參考。

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參考文獻：

[1]. Giuseppe Meroni, et al. D-Luciferin, derivatives and analogues: synthesis and in vitro/in vivo luciferase-catalyzed bioluminescent activity. ARKIVOC 2009 (i) 265-288.
[2]. Inoue Y, et al. Timing of imaging after d-luciferin injection affects the longitudinal assessment of tumor growthusing in vivo bioluminescence imaging. Int J Biomed Imaging. 2010;2010:471408.
[3]. Rajesh Shinde, et al. Luciferin derivatives for enhanced in vitro and in vivo bioluminescence assays. Biochemistry. 2006 Sep 19;45(37):11103-12.