真空離心濃縮結(jié)合真空負(fù)壓與離心力兩套作用條件,在去除溶劑的同時(shí),能夠降低樣品發(fā)生爆沸、飛濺的概率,廣泛用于核酸、蛋白等微量樣本處理。樣品飛濺大多來(lái)自常壓下溶劑劇烈沸騰,這套設(shè)備通過(guò)兩種物理力協(xié)同作用,改變?nèi)軇┱舭l(fā)模式,以此規(guī)避樣品濺出離心管的問題。
一、真空環(huán)境:降低沸點(diǎn),實(shí)現(xiàn)溫和蒸發(fā)
常壓環(huán)境中,溶劑達(dá)到沸騰溫度才會(huì)大量氣化,容易出現(xiàn)氣泡快速膨脹,將管內(nèi)樣品向外沖擊。
真空狀態(tài)下腔體內(nèi)部氣壓下降,溶劑的沸點(diǎn)隨之降低,不需要升到很高溫度,就可以完成揮發(fā)。樣品整體處于低溫氣化狀態(tài),不會(huì)產(chǎn)生劇烈翻滾的大體積氣泡,從根源減少爆沸的發(fā)生條件。
但只依靠真空還不夠。單純抽真空,部分粘度低的樣品依舊會(huì)出現(xiàn)起泡上浮,甚至沖出管口,所以還需要離心力進(jìn)行約束。
二、離心力:把樣品約束在管底,抑制氣泡上浮
設(shè)備運(yùn)行時(shí)轉(zhuǎn)子高速旋轉(zhuǎn),離心管保持傾斜擺放,產(chǎn)生持續(xù)向外的離心作用力。
管內(nèi)液體、氣泡都會(huì)受到指向管底方向的力。就算溶劑氣化生成細(xì)小氣泡,氣泡也很難向上浮起沖向管口。氣泡會(huì)停留在液體內(nèi)部逐步消散,液體組分被持續(xù)按壓在離心管底部,不會(huì)向管口方向涌動(dòng)。
離心力抵消真空帶來(lái)的起泡上浮趨勢(shì),液體被牢牢限定在管底區(qū)域,大大降低樣品沖出管體的可能性。
三、兩者協(xié)同,區(qū)別于普通加熱蒸發(fā)
普通加熱濃縮,依靠高溫讓溶劑沸騰,氣泡向上沖擊,微量樣品很容易損失。
真空離心濃縮模式下,蒸發(fā)發(fā)生在液體表層,不是整體劇烈沸騰。真空負(fù)責(zé)創(chuàng)造低溫?fù)]發(fā)條件,離心力負(fù)責(zé)約束液相位置,二者配合,實(shí)現(xiàn)表層緩慢氣化。
四、依然會(huì)出現(xiàn)飛濺的幾類現(xiàn)實(shí)誘因
這套機(jī)制可以減少飛濺,但不能杜絕,如果操作不當(dāng)依舊會(huì)出現(xiàn)樣品損失。
樣品裝液量過(guò)高,管內(nèi)剩余空間不足,即便有離心約束,起泡后也容易溢出。
部分樣品含有表面活性物質(zhì),極易產(chǎn)生大量泡沫,泡沫體量過(guò)大,會(huì)突破離心力的約束。
真空抽速過(guò)快,瞬間壓降,短時(shí)間大量生成氣泡,超出設(shè)備的抑制能力。
離心管蓋子沒有扣緊,存在縫隙,液體容易從縫隙向外逸出。
五、實(shí)操層面進(jìn)一步降低飛濺的小要點(diǎn)
控制單管裝樣體積,不要接近管口;針對(duì)易起泡樣品,可以設(shè)置梯度抽真空,放緩真空上升速度;確認(rèn)管蓋閉合到位;對(duì)于高起泡特性樣本,可適當(dāng)調(diào)低轉(zhuǎn)速,配合更長(zhǎng)濃縮時(shí)間。
總的來(lái)說(shuō),真空離心濃縮防飛濺的核心邏輯,就是真空實(shí)現(xiàn)低溫溫和氣化,離心力壓制氣泡上浮,雙重條件共同作用,減少爆沸與樣品外溢,更好保留管內(nèi)待測(cè)物質(zhì)。