SMC2 是 condensin 復合物的核心組分，與 SMC4 形成異源二聚體，在染色質凝集、有絲分裂染色體塑造及 DNA 損傷應答中發揮關鍵作用。該抗體 A300-058A 經過抗原親和純化，特異性識別人 SMC2 蛋白的 C 端區域（第 1150–1197 位氨基酸），適用于免疫細胞化學（ICC）、免疫沉淀（IP）和免疫印跡（WB）。本文基于由艾美捷Bethyl Laboratories推出的兔抗SMC2抗體親和純化抗體（貨號：A300-058A）詳細的規格，從基本特性、免疫原設計、各應用優化流程、功能背景及常見問題排查等方面提供系統性技術參考。

一、產品基本規格與儲存信息

參數| 內容

靶標| SMC2（CAP-E）

反應性| 人類

應用| ICC、IP、WB

宿主/克隆性 | 兔 / 多克隆

形式| 完整 IgG

免疫原| 位于第 1147 位殘基至 C 末端之間（具體 1150?1197）

亞型| IgG

標記物| 未標記

純度| 抗原親和純化

抗原種屬 | 人類

濃度| 1000 µg/ml（1 mg/ml）

保存條件 | 2?–?8?°C

有效期 | 自收貨之日起 1 年

緩沖液| Tris-檸檬酸/磷酸緩沖液，pH 7–8，含 0.09% 疊d化鈉

> 儲存與操作提示：  

> - 抗體應始終保存于 2–8?°C，切勿冷凍，冷凍會導致蛋白聚集和效價下降。  

> - 疊d化鈉作為防腐劑，可能抑制 HRP 活性；若需用于活細胞成像（如 ICC 前的活細胞標記），建議通過脫鹽柱去除。  

> - 抗體濃度通過比爾定律標定（A280?=?1.4 對應 1?mg/mL IgG），用戶可根據此值進行精確稀釋。

二、推薦應用與實驗條件

免疫印跡（Western Blot, WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000  

封閉液與抗體稀釋液：5% 脫脂牛奶 / TBST  

一抗孵育：4?°C 過夜（推薦）或室溫 2?3 小時  

二抗推薦：Goat anti?Rabbit IgG (H+L) HRP（A120-101P）  

檢測方式：增強型化學發光（ECL）

WB 實驗流程優化

1. 樣本制備：  

推薦陽性對照：HeLa、HEK293、K562 等人類細胞系全裂解液。  

使用 RIPA 裂解液（50?mM Tris?HCl pH 7.4, 150?mM NaCl, 1% NP?40, 0.5% 脫氧膽酸鈉, 0.1% SDS），添加蛋白酶抑制劑。  

上樣量：20–40?μg 總蛋白（SMC2 表達豐度中等）。

2. 電泳：  

建議使用 3–8% Tris?乙酸酯凝膠 或 6–8% SDS?PAGE（SMC2 分子量約 135–140?kDa）。  

電泳緩沖液：Tris?甘氨酸 SDS 或 Tris?乙酸酯 SDS。

3. 轉?。? 

使用 PVDF 膜（0.45?μm），甲醇活化。  

轉印條件：250?mA 恒流，120 分鐘；或 30?V 恒壓，4?°C 過夜。

4. 封閉：5% 脫脂牛奶 / TBST，室溫 1 小時。

5. 一抗孵育：  

用 5% 牛奶 / TBST 稀釋抗體至 1:2,000 – 1:10,000（s次建議 1:2,000）。  

- 4?°C 輕搖過夜。

6. 洗滌：TBST 洗滌 3–4 次，每次 8–10 分鐘。

7. 二抗孵育：HRP?山羊抗兔二抗（1:10,000–1:20,000），室溫 1 小時。

8. 再次洗滌后 ECL 檢測。

> 預期結果：應在約 135–140?kDa 處檢測到單一條帶。若出現多條低分子量條帶，提示蛋白降解或非特異性結合；可提高稀釋度至 1:10,000 并確保樣本新鮮。

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

用量：6?μg 抗體 / mg 總蛋白裂解液  

裂解液要求：使用非變性裂解緩沖液（不含 SDS，如 50?mM Tris pH 7.4, 150?mM NaCl, 1% NP?40, 0.5% 脫氧膽酸鈉），添加蛋白酶和磷酸酶抑制劑。

IP 詳細步驟

1. 細胞裂解：培養 1–2 個 10?cm 皿細胞（約 5–10?×?10?），加入 500?μL IP 裂解液，冰上裂解 30 分鐘，離心取上清。  

2. 預清除（可選）：加入 20?μL Protein?A 磁珠，4?°C 旋轉 1 小時。  

3. 抗體結合：取 1?mg 總蛋白，加入 6?μg A300-058A 抗體，4?°C 旋轉孵育過夜。  

4. 捕獲復合物：加入 30?μL Protein?A 磁珠，繼續孵育 2 小時。  

5. 洗滌：用 IP 裂解液洗滌磁珠 4–5 次。  

6. 洗脫：加入 30?μL 2× SDS 上樣緩沖液（含 DTT），95?°C 加熱 10 分鐘。  

7. WB 檢測：取上清進行 SDS?PAGE。

IP?WB 的特殊注意事項

由于 IP 洗脫液中含有抗體輕鏈（≈25?kDa）和重鏈（≈55?kDa），而 SMC2 分子量約 135–140?kDa（遠高于重鏈），理論上常規抗兔 H+L 二抗不會產生重疊干擾。但為獲得最干凈的印跡，仍推薦使用 抗兔 IgG 輕鏈特異性 HRP 二抗，并在封閉液中添加 5% 正常豬血清（貨號 S100?020），以c底消除重鏈信號的潛在干擾。

免疫細胞化學（Immunocytochemistry, ICC）

推薦稀釋范圍：1:200 – 1:400  

固定與通透：推薦 4% 多聚甲醛（PFA）固定 15 分鐘，隨后用 0.2% Triton?X?100 / PBS 通透 10 分鐘。  

封閉：5% 正常山羊血清 / PBS（或 3% BSA / PBS），室溫 30 分鐘。  

一抗孵育：用封閉液稀釋抗體至 1:200–1:400，4?°C 過夜。  

二抗：使用熒光標記的抗兔二抗（如 Alexa Fluor 488 或 568），稀釋比參照產品說明，室溫孵育 1 小時。  

核染色：DAPI（1?μg/mL）或 Hoechst 33342，室溫 5 分鐘。  

封片與觀察：使用抗熒光淬滅封片劑，共聚焦或熒光顯微鏡成像。

> 細胞周期依賴性信號：SMC2 作為 condensin 亞基，在有絲分裂期高度富集于染色體上。在間期細胞中，染色通常呈彌散核質分布，部分聚集于染色質區域。建議使用同步化細胞（如用諾考達唑處理獲得有絲分裂細胞）作為陽性對照，以驗證抗體在 ICC 中的性能。

三、該抗體的核心優勢

三重應用驗證：ICC、IP、WB 全覆蓋，一套抗體滿足不同實驗需求。  

C 末端特異性表位：避免與其他 SMC 家族蛋白交叉反應，WB 條帶單一。  

高稀釋度 WB：1:10,000 仍可獲得強信號，經濟性突出。  

IP 用量配方化：6?μg/mg 裂解物，無需梯度摸索。  

液態穩定保存：2–8?°C 一年有效，避免分裝凍融損失。