產品概述

由艾美捷Bethyl Laboratories推出的FANCI抗體（貨號A301-254A）是一款針對人源范可尼貧血互補組I蛋白（FANCI）的兔多克隆抗體，經抗原親和純化，以未偶聯完整IgG形式提供。該抗體特異性識別人源FANCI蛋白，適用于免疫印跡及免疫沉淀檢測，為DNA雙鏈斷裂修復及染色體穩定性維持機制研究提供可靠工具。

核心規格參數

參數 詳細信息

靶標 FANCI（范可尼貧血互補組I蛋白）

反應性 人類

宿主 兔

克隆性 多克隆

免疫原 第1025–1075位氨基酸區域

抗體形式 完整IgG

同型 IgG

偶聯物 未偶聯

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人類

濃度 200 µg/ml

緩沖液 Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

儲存條件 2–8 °C

保質期 到貨后1年

免疫原與特異性驗證

A301-254A抗體采用固相載體上固定的FANCI特異性表位進行親和純化。該抗體識別的表位位于人FANCI蛋白的第1025至1075位氨基酸之間（參考編號NP_060663.2，GeneID 55215）。免疫球蛋白濃度依據比爾定律測定：1 mg/mL IgG在A280波長處的吸光度為1.4。

特異性驗證要點：

免疫原區域位于蛋白C端附近（1025–1075 aa），該區域在FANCI同源物中具有較強特異性

經抗原親和純化，顯著降低非特異性交叉反應，尤其避免與FANCD2等其他FA家族蛋白的交叉識別

建議使用FANCI敲除細胞裂解液作為陰性對照驗證特異性

應用方法與推薦工作濃度

免疫印跡（WB）

推薦稀釋范圍：1:2,000 – 1:10,000

實驗方案要點：

封閉液及抗體稀釋液：含5%脫脂牛奶的TBST

一抗孵育條件：4°C孵育過夜（推薦）

細胞裂解液檢測：使用山羊抗兔IgG重鏈+輕鏈抗體（貨號A120-101P）作為二抗

免疫沉淀物檢測：使用兔IgG輕鏈特異性HRP二抗，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）以降低背景

> 功能性提示：FANCI在細胞中表達水平相對較低，建議使用富集了染色質結合組分的裂解液或同步化至S/G2期的細胞樣本，以提高檢測靈敏度。

免疫沉淀（IP）

推薦用量：6 µg 抗體 / mg 細胞裂解物

操作注意事項：

裂解緩沖液推薦使用含150–300 mM NaCl的非變性裂解液（如NP-40或Triton X-100緩沖液），以保留蛋白復合物完整性

裂解液中必須添加蛋白酶抑制劑（如PMSF、蛋白酶抑制劑混合物）及磷酸酶抑制劑

抗體與裂解物共孵育：4°C旋轉孵育2小時至過夜

使用Protein A/G磁珠或瓊脂糖珠捕獲免疫復合物

洗脫后建議使用輕鏈特異性二抗進行WB檢測，避免重鏈信號干擾

復合物共沉淀：FANCI通常與FANCD2形成異源二聚體（I-D復合物），在IP-FANCI后，可用WB檢測FANCD2的共沉淀，以驗證復合物完整性。

靶點生物學背景：FANCI

FANCI（范可尼貧血互補組I蛋白）是范可尼貧血（FA）通路的核心成員之一。FA通路是一種專門的DNA鏈間交聯修復機制，對維持基因組穩定性至關重要。

核心功能：

1. DNA鏈間交聯修復：FANCI與FANCD2形成異源二聚體（I-D復合物），在DNA損傷后被單泛素化激活，定位于染色質上的DNA損傷位點，募集下游修復因子（如FAN1、BRCA1、BRCA2/FANCD1等），通過同源重組或轉損傷合成途徑修復交聯損傷。

2. 染色體穩定性維持：FANCI參與DNA雙鏈斷裂修復及復制叉停滯后的重啟過程。FA通路功能缺失直接導致染色體脆性增加及自發染色體斷裂。

3. 復制叉保護：FANCI-FANCD2復合物在復制壓力下保護新生DNA鏈免受過度降解。

臨床關聯：

FANCI基因突變導致范可尼貧血互補組I，這是一種常染色體隱性遺傳病，特征包括：進行性骨髓衰竭（全血細胞減少）、先天性畸形（如拇指畸形、皮膚色素沉著、身材矮小）、以及j高的癌癥易感性（尤其是急性髓系白血病和頭頸部鱗癌）。

FANCI在腫瘤細胞中常出現異常表達，可能影響化療藥物（尤其是DNA交聯劑如s裂霉素C、順鉑）的耐藥性。

蛋白特征：

分子量：約150 kDa

結構域：包含N端核定位信號、與FANCD2相互作用的區域以及C端泛素化修飾位點

儲存與穩定性指南

儲存溫度：2–8°C，請勿冷凍。反復凍融會導致抗體聚集及活性下降。

防腐劑：0.09%疊d化鈉，可抑制微生物生長。若用于細胞培養或活細胞實驗，需通過透析或脫鹽柱去除。

穩定劑：0.1% BSA，降低非特異性吸附及管壁損耗。

有效期：自到貨之日起1年。建議分裝成單次使用量儲存于2–8°C，避免反復開管。

總結：A301-254A是一款針對人FANCI蛋白C端區域（1025–1075 aa）的親和純化兔多抗，專門優化了IP（6 µg/mg裂解物）和WB（1:2000–1:10000）應用。其高特異性經抗原親和純化保障，適合研究范可尼貧血通路中FANCI-FANCD2復合物的組裝、泛素化激活及DNA損傷修復功能。在IP-WB實驗中，建議搭配輕鏈特異性二抗以避免信號干擾。該抗體為FA通路機制研究、DNA交聯修復及癌癥耐藥性分析提供了可靠的工具。