一、產(chǎn)品概述

本產(chǎn)品由艾美捷Bethyl Laboratories推出，是一款針對(duì)人Cry1蛋白的高親和力兔多克隆抗體（貨號(hào) A302-614A），經(jīng)抗原親和純化制備。該抗體適用于免疫沉淀（IP）及蛋白質(zhì)印跡（WB）檢測(cè)，僅供研究使用。

Cry1（Cryptochrome 1）是生物鐘負(fù)反饋調(diào)控回路中的藍(lán)光依賴性核心調(diào)節(jié)因子。它與Cry2協(xié)同作用，抑制CLOCK|NPAS2-ARNTL復(fù)合物介導(dǎo)的E盒依賴性轉(zhuǎn)錄，從而維持晝夜節(jié)律的周期長(zhǎng)度與穩(wěn)定性。與植物和細(xì)菌中的光裂解酶同源物不同，哺乳動(dòng)物Cry1不具有光裂解酶活性，但其能夠?qū)ER蛋白等晝夜節(jié)律核心蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞核，完成轉(zhuǎn)錄抑制。CRY1基因突變與睡眠相位延遲綜合征（DSPD）等晝夜節(jié)律紊亂疾病密切相關(guān)，同時(shí)也在癌癥、代謝疾病及免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。

二、產(chǎn)品規(guī)格

參數(shù) 詳細(xì)信息

靶標(biāo) Cry1

反應(yīng)種屬 人

應(yīng)用 IP， WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原 位于第536位至C末端之間

同種型 IgG

偶聯(lián)物 未偶聯(lián)

純度 抗原親和純化

抗原種屬 人

濃度 200 µg/mL

緩沖液 Tris緩沖鹽水，含0.1% BSA及0.09%疊d化鈉

儲(chǔ)存條件 2–8°C

有效期 自收貨之日起1年

三、靶標(biāo)詳細(xì)信息

3.1 別名

cryptochrome 1 (photolyase-like)， cryptochrome circadian clock 1， DSPD， PHLL1。

3.2 功能背景

Cry1是哺乳動(dòng)物晝夜節(jié)律系統(tǒng)的核心組分，其功能機(jī)制如下：

轉(zhuǎn)錄抑制作用：在細(xì)胞核內(nèi)，Cry1與Cry2形成復(fù)合物，直接結(jié)合CLOCK-BMAL1異二聚體，抑制其介導(dǎo)的Per和Cry自身基因的轉(zhuǎn)錄激活，形成約24小時(shí)的負(fù)反饋回路。

核轉(zhuǎn)運(yùn)功能：Cry1與PER蛋白相互作用，促進(jìn)PER蛋白從細(xì)胞質(zhì)轉(zhuǎn)入細(xì)胞核，這是維持周期長(zhǎng)度所必需的步驟。

藍(lán)光感應(yīng)（非哺乳動(dòng)物）：在低等生物中，Cry作為藍(lán)光受體；但在哺乳動(dòng)物中，Cry1的光感應(yīng)功能已退化，主要作為轉(zhuǎn)錄抑制因子發(fā)揮作用。

疾病相關(guān)性：CRY1基因的功能獲得性突變與家族性睡眠相位延遲綜合征（DSPD）相關(guān)；此外，Cry1在多種癌癥中表達(dá)異常，影響腫瘤細(xì)胞增殖及化療敏感性。

四、抗體制備與純化

4.1 免疫原及表位定位

本抗體采用的免疫原對(duì)應(yīng)人Cry1蛋白序列中第536位至C末端之間的區(qū)域。經(jīng)精確定位，A302-614A所識(shí)別的表位位于第536–586氨基酸區(qū)間（參考序列NP_004066.1）。該區(qū)域位于C端功能域，具有較高的抗原特異性，避免了與Cry2或其他含光裂解酶結(jié)構(gòu)域蛋白的交叉反應(yīng)。

4.2 純化方法

抗體通過抗原親和層析純化。將針對(duì)Cry1 C端表位（第536–586位）的特異性多肽固定于固相載體，使抗血清中的特異性IgG結(jié)合于該表位，經(jīng)洗脫獲得高純度抗體。此法確保最終產(chǎn)品中只保留識(shí)別目標(biāo)表位的抗體分子，顯著降低非特異性背景。

4.3 濃度測(cè)定

免疫球蛋白濃度采用比爾定律測(cè)定，以1 mg/mL IgG在280 nm下的吸光度（A280）為1.4作為標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)測(cè)濃度為200 µg/mL。相較于部分抗體1 mg/mL的濃度，本抗體濃度較低，使用時(shí)需根據(jù)推薦稀釋比例進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整，避免因稀釋過度導(dǎo)致信號(hào)減弱。

4.4 緩沖液與防腐劑

抗體儲(chǔ)存于Tris緩沖鹽水（TBS），含0.1%牛血清白蛋白（BSA）作為穩(wěn)定劑，及0.09%疊d化鈉作為防腐劑。BSA可防止抗體在低濃度下吸附于管壁，保持其穩(wěn)定性。注意：疊d化鈉有毒，操作時(shí)請(qǐng)佩戴防護(hù)手套。若用于需要疊氮化物敏感的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)或動(dòng)物注射，使用前應(yīng)通過透析或超濾去除疊d化鈉。

五、儲(chǔ)存與穩(wěn)定性

收到產(chǎn)品后，請(qǐng)將抗體置于2–8°C條件下儲(chǔ)存。切勿冷凍，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性聚集、效價(jià)下降。在推薦的儲(chǔ)存條件下，自收貨之日起1年內(nèi)可保持穩(wěn)定。由于本抗體濃度較低（200 µg/mL），不建議再進(jìn)行分裝凍存（稀釋后更易降解），應(yīng)直接于2–8°C原管保存，每次取用后立即放回。

六、應(yīng)用指南

以下推薦條件均經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，用戶可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)體系進(jìn)行優(yōu)化。所有WB實(shí)驗(yàn)的封閉及抗體稀釋均使用5%脫脂奶粉-TBST緩沖液，一抗孵育推薦4°C過夜。

6.1 蛋白質(zhì)印跡（Western Blot， WB）

推薦稀釋比：1:2000 – 1:10000

注意事項(xiàng)：由于抗體母液濃度為200 µg/mL，按1:2000稀釋后工作濃度為0.1 µg/mL；按1:10000稀釋后工作濃度為0.02 µg/mL。該范圍經(jīng)驗(yàn)證有效，但建議s次實(shí)驗(yàn)從1:2000開始，根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度調(diào)整。

樣本要求：人細(xì)胞裂解液（如HeLa、U2OS、HEK293）。Cry1蛋白分子量約66–70 kDa，使用常規(guī)10% SDS-PAGE凝膠即可有效分離。

轉(zhuǎn)膜條件：常規(guī)濕轉(zhuǎn)（100V，60–90分鐘）或半干轉(zhuǎn)，PVDF或NC膜均可。

6.2 免疫沉淀（Immunoprecipitation， IP）

推薦用量：每毫克細(xì)胞裂解液總蛋白使用6 µg抗體。

由于母液濃度200 µg/mL，取6 µg抗體體積為30 µL。對(duì)于1 mg總蛋白的裂解液，加入30 µL抗體原液。

6.3 跨種屬反應(yīng)性說明

本抗體僅經(jīng)驗(yàn)證可識(shí)別人（human）Cry1。未測(cè)試小鼠、大鼠或其他種屬。根據(jù)表位序列（第536–586位）與其他哺乳動(dòng)物Cry1的比對(duì)，人鼠同源性約85%，可能存在交叉反應(yīng)，但不保證有效。建議優(yōu)先使用人樣本。

參考文獻(xiàn)（部分）：

Griffin EA Jr， et al. (1999) *Science* 286: 768–771.

Kume K， et al. (1999) *Cell* 98: 193–205.

Patke A， et al. (2017) *Cell* 169: 203–215.

注意：本產(chǎn)品僅限研究使用，不得用于診斷或治療。用戶應(yīng)自行驗(yàn)證抗體在其特定實(shí)驗(yàn)體系中的適用性。以上信息覆蓋了A302-614A抗體的全部規(guī)格、應(yīng)用參數(shù)及背景知識(shí)，使用者可據(jù)此快速建立實(shí)驗(yàn)方案，獲得可靠且可重復(fù)的檢測(cè)結(jié)果。