標簽 : Aβ抗體 愛賽因生物 微孔板  酶標板  封板膜 小鼠試劑盒

　　小鼠Aβ ELISA試劑盒的詳細操作步驟

　　小鼠Aβ ELISA試劑盒?的詳細操作步驟如下，基于高可信度資料整合優化，確保檢測結果準確可靠，適用于血清、血漿、細胞上清及組織勻漿中β淀粉樣蛋白(Aβ)的定量分析。

　　檢測原理

　　采用?雙抗體夾心法ELISA?：

　　微孔板預包被特異性抗小鼠Aβ抗體 → 樣本中Aβ與固相抗體結合 → 加入HRP標記的檢測抗體 → 形成“抗體-抗原-酶標抗體"復合物 → TMB底物顯色 → 酶標儀450nm測定OD值 → 通過標準曲線計算Aβ濃度。

　　詳細操作流程(96T板)

　　1. ?試劑與樣本準備?

　　試劑盒從2–8℃取出，?室溫平衡15–30分鐘?，避免冷凝水影響反應。

　　濃縮洗滌液若有結晶，37℃水浴溶解后混勻使用。

　　標準品稀釋?：按說明書梯度稀釋(如160 → 80 → 40 → 20 → 10 → 5 pg/mL)，逐級混勻，避免交叉污染。

　　樣本處理?：

　　血清/血漿：3000×g離心10–30分鐘，取上清。

　　組織勻漿：按1:9加PBS研磨，5000×g離心5–10分鐘取上清。

　　所有樣本分裝凍存于-20℃，避免反復凍融。

　　禁止使用含NaN?的樣本?，因其抑制HRP酶活性。

　　2. ?加樣設置?

　　設?空白孔?(不加樣品和酶標試劑)、?標準品孔?(50μL/孔)、?待測樣本孔?。

　　樣本孔：先加?40μL樣品稀釋液? + ?10μL樣本?(終稀釋倍數為5倍)。

　　加樣至孔底，避免觸碰孔壁，輕震混勻。

　　3. ?37℃溫育?

　　封板膜密封，?37℃恒溫箱溫育30分鐘?。

　　避免震動、光照或溫度波動。

　　4. ?洗滌(關鍵控背景步驟)?

　　揭掉封板膜，棄液，每孔加滿?300–400μL洗滌液?(PBST含0.05% Tween-20)。

　　靜置30秒后甩干，重復?5次?。

　　最后一次在吸水紙上輕拍拍干，防止殘留液滴稀釋后續試劑。

　　5. ?加酶標試劑?

　　每孔加?50μL HRP標記抗體?(空白孔除外)。

　　重新封板，?37℃溫育30分鐘?。

　　6. ?再次洗滌?

　　同第4步，洗滌5次并拍干。

　　7. ?顯色反應?

　　每孔加?顯色劑A液50μL + B液50μL?，輕搖混勻。

　　37℃避光顯色10–15分鐘?(Aβ1-42建議10分鐘，Aβ40可延長至15分鐘)。

　　顯色時間過長會導致背景升高，需嚴格控制。

　　8. ?終止反應?

　　每孔加?50μL終止液?，顏色由藍變黃。

　　終止后?15分鐘內完成讀數?，防止OD值漂移。

　　9. ?測定OD值?

　　酶標儀設置：?450nm波長?，參考波長可選630nm校正。

　　以空白孔調零，記錄各孔OD值。

　　10. ?結果計算?

　　繪制標準曲線：濃度為橫坐標，OD值為縱坐標。

　　使用線性回歸或4參數擬合(推薦)計算樣本濃度。

　　實際濃度 = 計算值 × 稀釋倍數(如5倍)。

　　建議做復孔，取平均值以提高重復性。

　　注：以上僅供參考，不作為實驗依據，具體請聯系品牌或技術老師!

　　小鼠Aβ ELISA試劑盒?愛賽因生物技術(廣州)有限公司專注于生物醫藥、臨床診斷、IVD檢測、微流控芯片等領域的封板膜及生物醫療膠帶產品的研發、生產與銷售。更有良好的售后服務和優質的解決方案,歡迎來電!