HPLC與經典液相色譜相比有以下點:
速度快——通常分析一個樣品在15~30 min,有些樣品甚至在5 min內即可完成。
分辨率——可選擇固定相和流動相以達到*分離效果。
靈敏度——紫外檢測器可達0.01ng,熒光和電化學檢測器可達0.1pg。
柱子可反復使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少,容易回收——樣品經過色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。
HPLC對流動相的基本要求是:
①與固定相不互溶,不發生化學反應。
②對樣品有適宜的溶解度,要求k值在1~10范圍內(可用范圍)或2~5(*范圍)。溶解度太大,k值太小,不利于分離;溶解度太小,k值太大,可能使樣品在流動相中產生沉淀。
③必須與檢測器相適應。例如用紫外檢測器,流動相本身在檢測波長處應無吸收。
④流動相的粘度要小,可以降低色譜柱的阻力而提柱效。
⑤純度,不含機械雜質。
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