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熒光染料選擇困難癥的*
熒光染料大總結！
熒光顯微鏡技術的基本原理是借助熒光劑讓細胞成分呈現高度具體的可視化效果，比如在目的蛋白后面連一個通用的熒光蛋白—GFP。在組織樣本中，目的基因無法進行克隆，則需要用免疫熒光染色等其他技術手段來觀察目的蛋白。為此，就需要利用抗體，這些抗體連接各種不同的熒光染料，直接或間接地與相應的靶結構相結合。此外，借助熒光染料，熒光顯微鏡技術不只局限于蛋白質，它還可以對核酸、聚糖等其他結構進行染色，即便鈣離子等非生物物質也可以檢測出來。本文就對幾種常用的熒光劑進行了具體的介紹。
免疫熒光 (IF)
在熒光顯微鏡技術中，可以通過兩種方式觀察到你的目的蛋白：利用內源熒光信號，即通過克隆手段，用遺傳學方法將熒光蛋白與目的蛋白相連；或利用熒光標記的抗體特異性結合目的蛋白。有些生物學問題采用第二種方法會更有用或更有必要。比如，組織學樣品無法使用熒光蛋白，因為通常來說，標本都是從無法保存熒光蛋白的生物體中獲取。此外，當有一個有功能的抗體可用時，免疫熒光法會比熒光蛋白技術快很多，因為后者必須先克隆目的基因再將DNA轉染到適當的細胞中。熒光蛋白的另一項劣勢在于其本身屬于蛋白質。因此，細胞內的這些熒光蛋白具有特定的蛋白質特性，其會導致附著的目的蛋白質發生功能紊亂或出現誤釋的情況。然而，熒光蛋白技術仍然是觀察活細胞的方法。
免疫熒光法利用了抗體可以和相應抗原特異性結合的這個特性，對此它還有兩種不同的表現形式。zui簡單的方式是使用可與目的蛋白相結合的熒光標記抗體。這種方法被稱為“直接免疫熒光法”。
在很多情況下，我們可以利用兩種不同特性的抗體。*種抗體可以結合目的蛋白，但其本身并未進行熒光標記（一抗）。第二種抗體本身就攜帶熒光染料（二抗），并且可以特異性結合一抗。這種方法被稱為“間接免疫熒光法”。這種方法存在諸多優勢。一方面，它會產生放大效應，因為不只一個二抗可以與一抗相結合。另一方面，沒有必要始終用熒光染料標記目的蛋白的每個抗體，但可以使用市售熒光標記的二抗。免疫熒光中廣泛使用的熒光染料包括 FITC、TRITC 或一些Alexa Fluor®染料，下文均有提及。
FITC 和 TRITC
異硫氰酸熒光素(FITC) 是一種有機熒光染料，目前，這種熒光染料仍用于免疫熒光和流式細胞術中。在 495/517 nm 處，該染料會產生激發/發射峰值，并可借助異硫氰酸鹽反應基團與不同抗體結合，該基團可以和蛋白質上的氨基、巰基、咪唑、酪氨酰、羰基等基團相結合。而它的基本成分—— 熒光素，其摩爾質量為 332 g/mol，常被用作熒光示蹤劑。FITC(389 g/mol) 是用于熒光顯微鏡技術的*染料，且其被當成 Alexa Fluor®488 等后續熒光染料的發端。該染料的熒光活性取決于它的大共軛芳香電子系統，而該系統受藍色光譜中的光所激發。
經常與 FITC 同時使用的另一種染料是與其相似的TRITC [四甲基羅丹明-5(6)-異硫氰酸]。與 FITC 相反，TRITC 并非熒光素，而是羅丹明家族的衍生物。羅丹明也具有一個大的共軛芳香電子系統，正是該系統引發了它們的熒光行為。還有一點與FITC 相反，TRITC (479 g/mol) 由zui大波長為 550nm的綠色光譜中的光所激發，它的zui大發射波長為 573 nm。與蛋白質（例如，抗體）結合也基于異硫氰酸鹽反應基團。
雖然 FITC 和 TRITC 仍在使用，但由于它們屬于發光相對較弱的熒光染料且它們的優勢僅僅是經濟實惠，因此，在的顯微鏡技術中并不推薦。
圖 1：果蠅胚胎發育，綠色：FITC；紅色：TRITC
青色素
這類熒光染料相對較少，從青色素衍生而來，也是其名稱的由來：Cy2、Cy3、Cy5 和Cy7。上述所有青色素均可以通過其反應基團與核酸或蛋白相連。例如，采用了蛋白標記的馬來酰亞胺基團。有趣的是，對于熒光，Cy5 對其周邊電子環境非常敏感，該特征可用于酶測定。附著蛋白質的構象改變會導致熒光發射產生陽性或陰性變化。此外，Cy3 和 Cy5 還可用于 FRET 試驗。青色素染料是一種相對較老的熒光染料，但卻是其他熒光染料在亮度、耐光性、量子產率等方面得以改善的基礎。
Alexa Fluor®染料
Alexa Fluor®染料是帶負電荷且親水的熒光染料系列，該系列染料囊括范圍較廣，且經常用于熒光顯微鏡技術之中。這些染料的名稱是由其Richard Paul Haugland 以他兒子 Alex Haugland 的名字命名的。該產品標識是 Molecular Probes（美國生命科學技術公司 Life Technologies旗下子公司，注：2014年2月Life Technologies被Thermo Fisher收購）的商標。此外，這些產品標識中也涵蓋了相應的激光激發波長。例如，應用范圍很廣且zui大激發波長為 493 nm的Alexa Fluor®488，可由標準的488 nm激光激發。Alexa Fluor®488的zui大發射波長為 519 nm，正是因為具備上述特性，使得 Alexa Fluor®488與 FITC 的屬性相似。盡管 Alexa Fluor®488是一種熒光素衍生物，但與 FITC 相反，它擁有更佳的穩定性和熒光亮度，且 pH 敏感度也更低。所有 Alexa Fluor® 染料（比如，Alexa Fluor®546、Alexa Fluor®633）都是不同基礎熒光物質的磺化形式，例如，熒光素、香豆素、青色素或羅丹明，它們的摩爾質量在410 至 1400 g/mol 范圍之內。
圖 2：小鼠轉基因胚胎、肢間體節，E10.5 小鼠轉基因胚胎的 5 個肢間體節：EpaxialMyf5 eGFP；GFP-Alexa 488 免疫組化染色；用 Desmin-Cy3 對胚胎肌肉纖維進行染色，用 Hoechst Size 自上而下揭示細胞核：3.5 mm (a)，800 µm (b)。圖片來源：Aurélie Jory, CellulesSouches et Développement, Institut Pasteur, Paris,France and Imaging centre of IGBMC, IGBMC。
圖 3：小鼠成纖維細胞，綠色：F-Actin，FITC；紅色：Tubulin，Cy5；藍色：細胞核，DAPI。圖片來源：德國·海德爾堡·馬克斯-普朗克研究所·Günter Giese博士
DNA 染色
在熒光顯微鏡技術中，不只研究蛋白結構，核酸同樣具有重要的研究意義。有時候，必須通過檢測細胞核來確定細胞的位置及其數量。zui常用的一種DNA 染色劑當屬 DAPI (4',6-二脒基-2-苯基吲哚) ，其可與DNA 雙螺旋的 A-T 富集區域相結合。如果 DAPI 附著到 DNA 上，其熒光強度將比游離狀態要高。該染色劑受zui大波長為358 nm的紫外光激發，其發射光譜非常寬，在461 nm 處達到峰值。此外，還可對弱熒光進行 RNA 結合檢測。在這種情況下，發射波長將轉移至 500 nm。有趣的是，DAPI 能夠穿透整個細胞膜。因此，它可以用于固定和活細胞之中。
第二種被廣泛使用的DNA 染色劑就是 Hoechst 染料系列，這些染料原先都是由 Hoechst AG 這家化學公司生產的。Hoechst 33258、Hoechst 33342以及Hoechst 34580 均為雙苯酰亞胺，可嵌入 A-T 富集區域，因此，該系列染料很少用到。與 DAPI 相似，這三種染色劑都可受zui大發射波長為455 nm的紫外光激發，而未被結合的染色劑，其zui大發射波長在 510–540 nm 之間。Hoechst 染色劑還具有細胞滲透性，因此可用于活細胞或已固定的細胞中。該染色劑與DAPI 的不同之處在于，它們的毒性較低。
碘化丙啶（Propidium-Iodide，PI）是一種不能透過細胞膜的 DNA 染色劑。由于具備上述特性，該染色劑無法進入完整的細胞中，因此，該染色劑常用于區分細胞群中的活細胞和死細胞。此外，碘化丙啶還是一種嵌入劑，但對于不同的堿基并不存在結合的差異性。該染色劑與核酸結合后，zui大激發波長為538 nm，zui大發射波長為 617 nm。未結合 PI 的zui大激發和發射波長和光強會更低一些。PI 還可結合 RNA，同時無需改變自身的熒光特性。有時候為了區分DNA 和 RNA，有必要使用適當的核酸酶。
不需要前期處理，吖啶橙就可以鑒別DNA 與 RNA 。吖啶橙與 DNA 結合后，zui大激發/發射波長為 502 nm/525 nm，而與 RNA 結合后，zui大激發/發射波長為460 nm/650 nm。此外，它還能夠進入溶酶體等酸性區室。在這里，陽離子染料被質子化。在這種酸性環境下，吖啶橙由藍色光譜中的光激發，但發射波長在橙色區域達到zui大。由于凋亡細胞具有大量被吞噬的酸性區室，因此，吖啶橙常用作此類細胞的標記物。
區室和細胞器特異性染料
在熒光顯微鏡技術中，往往要對溶酶體、核內體等細胞區室以及線粒體等細胞器進行染色。為此，該部分介紹了一系列可供選擇使用的特異性染料。
觀察線粒體zui常用的方法就是利用 MitoTracker®，它是一種可透過細胞的染料，包含輕度巰基化的氯甲基活性部分。正因如此，它可與半胱氨酸殘基的游離硫醇基反應，從而與基質蛋白實現共價結合。MitoTracker® 有不同的顏色和修飾類型（參見表 1），此外，它還是 Molecular Probes 的商標。與羅丹明 123 (Rh123) 或 tetramethylrosamine等常規線粒體特異性染色劑不同，在用固定劑破壞膜電位后，MitoTracker®不會被洗掉。
依據線粒體染色劑，還有些染料可以標記溶酶體等酸性區室，這類染料被稱為LysoTracker。它們由連接一個熒光基團的弱堿基團組成，具有膜穿透性。zui有可能的情況是，這些堿基因質子化作用的影響而對酸性區室具有親和性。LysoTracker具有多種不同的顏色可供選擇（參見表 1）。
與溶酶體相似的區室是釀酒酵母等真菌中的液泡，這種膜密閉空間也是一種酸性環境。如果要在熒光顯微鏡下觀察上述區室，則要使用FM 4-64®或FM 5-95®等苯乙烯基染料。
對于蛋白質分泌實驗，內質網 (ER) 具有重要的研究意義。對上述區室進行染色的一種典型染料為DiOC6(3)。該染料雖然偏好 ER，但仍會結合線粒體等其他細胞器膜。對ER 進行特異性染色的另一種方法是，使用 ER-Tracker Green 和 Red 等 ER-Tracker，而 ER-Tracker Green 和 Red 是基于 BODIPY 的兩種染料，其與格列本脲（一種磺酰基脲酶）連接，并可與僅存于內質網膜上的ATP敏感性鉀通道結合。BODIPY（硼-二吡咯亞甲基，boron-dipyrromethene）是一種幾乎不溶于水的、對pH 相對不敏感的染料基團，該染料對蛋白質標記沒太大用處，但卻是脂質和膜標記的良好工具。
對于與ER相鄰的高爾基體，可以用 NBD C6-ceramide 和BODIPYFL C5-ceramide 等熒光神經酰胺類似物對其進行標記。 上述神經酰胺為鞘脂類，其在高爾基體中高度富集。
借助基于脂質的染料，可以對脂筏等特異膜區域進行染色。使用 NBD-6Cholestrol或NBP-12 Cholesterol 可以觀察膽固醇富集區域（Avanti Polar Lipids）。
除了使用特異性非蛋白熒光染料對細胞區室進行標記之外，還可以借助對細胞中不同位置有偏好的蛋白質對目標區域進行染色。這些蛋白質可以和熒光染料相連，并可通過熒光顯微鏡進行觀察。運用這種方法的一個實例是：麥胚凝集素(WGA) 可以與細胞質膜中的唾液酸和N-乙酰葡萄糖胺基特異性結合，將WGA 與熒光染料偶聯，這樣我們就可以觀察到細胞質膜了。
圖 4：Pukinje細胞，小鼠小腦皮質三重標記的縱側截面圖。紅色：anti-calbindin-D28k/Cy3；綠色：anti-GFAP/Cy5；藍色：Hoechst 33258
圖 5：牛肺部內皮細胞。紅色：用 MitoTracker®Red CMXRos 標記的線粒體；綠色：用綠色熒光 BODIPY®FLphallacidin 標記的纖維狀肌動蛋白；藍色：用 DAPI 標記的細胞核。使用三維盲反褶積可以改善該圖像的質量。
離子成像
在有關神經元方面的研究中，觀察基因活性或細胞運動等對于了解細胞的離子濃度具有重要意義。鈉、鈣、氯或鎂離子對很多不同的細胞活動都具有較大影響。一般情況下，借助熒光標記的螯合劑可將離子困住，螯合劑在結合相應離子后會改變離子的光譜特性。例如，利用該原理的鈣指示劑fura-2、indo-1、fluo-3、fluo-4和Calcium-Green 等。
對于鈉離子的檢測，通常使用 SBFI (sodium-bindingbenzofurzanisophthalate) 或Sodium Green。PBFI(potassium-binding benzofurzanisophthalate) 可以檢測鉀離子。
有趣的是，還存在以蛋白質為主的鈣指示劑，其中一種是基于水母化學發光蛋白—水母素。水母素、發光體腔腸素、分子氧和 Ca2+的相互作用會釋放藍光，這是在熒光蛋白質的發現過程中非常的機制。
熒光染料及其激發和發射波長峰值
上文提到的所有染料在下表中均有統計。此外，還涵蓋了其他熒光染料及其激發和發射波長峰值。
熒光染料示例 | 激發光 |
Indo-1, Ca saturated | 331 nm |
Indo-1 Ca2+ | 346 nm |
Cascade Blue BSA pH 7.0 | 401 nm |
Cascade Blue | 398 nm |
LysoTracker Blue | 373 nm |
Alexa 405 | 401 nm |
LysoSensor Blue pH 5.0 | 374 nm |
LysoSensor Blue | 374 nm |
DyLight 405 | 399 nm |
DyLight 350 | 332 nm |
BFP (Blue Fluorescent Protein) | 380 nm |
Alexa 350 | 343 nm |
7-Amino-4-methylcoumarin pH 7.0 | 346 nm |
Amino Coumarin | 345 nm |
AMCA conjugate | 347 nm |
Coumarin | 360 nm |
7-Hydroxy-4-methylcoumarin | 360 nm |
7-Hydroxy-4-methylcoumarin pH 9.0 | 361 nm |
6,8-Difluoro-7-hydroxy-4-methylcoumarin pH 9.0 | 358 nm |
Hoechst 33342 | 352 nm |
Pacific Blue | 404 nm |
Hoechst 33258 | 352 nm |
Hoechst 33258-DNA | 352 nm |
Pacific Blue antibody conjugate pH 8.0 | 404 nm |
PO-PRO-1 | 434 nm |
PO-PRO-1-DNA | 435 nm |
POPO-1 | 433 nm |
POPO-1-DNA | 433 nm |
DAPI-DNA | 359 nm |
DAPI | 358 nm |
Marina Blue | 362 nm |
SYTOX Blue-DNA | 445 nm |
CFP (Cyan Fluorescent Protein) | 434 nm |
eCFP (Enhanced Cyan Fluorescent Protein) | 437 nm |
1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic acid (1,8-ANS) | 375 nm |
Indo-1, Ca free | 346 nm |
1,8-ANS (1-Anilinonaphthalene-8-sulfonic acid) | 375 nm |
BO-PRO-1-DNA | 462 nm |
BOPRO-1 | 462 nm |
BOBO-1-DNA | 461 nm |
SYTO 45-DNA | 451 nm |
evoglow-Pp1 | 448 nm |
evoglow-Bs1 | 448 nm |
evoglow-Bs2 | 448 nm |
Auramine O | 431 nm |
DiO | 487 nm |
LysoSensor Green pH 5.0 | 447 nm |
Cy 2 | 489 nm |
LysoSensor Green | 447 nm |
Fura-2, high Ca | 336 nm |
Fura-2 Ca2+sup> | 336 nm |
SYTO 13-DNA | 488 nm |
YO-PRO-1-DNA | 491 nm |
YOYO-1-DNA | 491 nm |
eGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) | 488 nm |
LysoTracker Green | 503 nm |
GFP (S65T) | 489 nm |
BODIPY FL, MeOH | 502 nm |
Sapphire | 396 nm |
BODIPY FL conjugate | 503 nm |
MitoTracker Green | 490 nm |
MitoTracker Green FM, MeOH | 490 nm |
Fluorescein 0.1 M NaOH | 493 nm |
Calcein pH 9.0 | 494 nm |
Fluorescein pH 9.0 | 490 nm |
Calcein | 493 nm |
Fura-2, no Ca | 367 nm |
Fluo-4 | 494 nm |
FDA | 495 nm |
DTAF | 495 nm |
Fluorescein | 495 nm |
Fluorescein antibody conjugate pH 8.0 | 493 nm |
CFDA | 495 nm |
FITC | 495 nm |
Alexa Fluor 488 hydrazide-water | 493 nm |
DyLight 488 | 493 nm |
5-FAM pH 9.0 | 492 nm |
FITC antibody conjugate pH 8.0 | 495 nm |
Alexa 488 | 493 nm |
Rhodamine 110 | 497 nm |
Rhodamine 110 pH 7.0 | 497 nm |
Acridine Orange | 431 nm |
Alexa Fluor 488 antibody conjugate pH 8.0 | 499 nm |
BCECF pH 5.5 | 485 nm |
PicoGreendsDNA quantitation reagent | 502 nm |
SYBR Green I | 498 nm |
Rhodaminen Green pH 7.0 | 497 nm |
CyQUANT GR-DNA | 502 nm |
NeuroTrace 500/525, green fluorescent Nissl stain-RNA | 497 nm |
DansylCadaverine | 335 nm |
Rhodol Green antibody conjugate pH 8.0 | 499 nm |
Fluoro-Emerald | 495 nm |
Nissl | 497 nm |
Fluorescein dextran pH 8.0 | 501 nm |
Rhodamine Green | 497 nm |
5-(and-6)-Carboxy-2', 7'-dichlorofluorescein pH 9.0 | 504 nm |
DansylCadaverine, MeOH | 335 nm |
eYFP (Enhanced Yellow Fluorescent Protein) | 514 nm |
Oregon Green 488 | 498 nm |
Oregon Green 488 antibody conjugate pH 8.0 | 498 nm |
Fluo-3 | 506 nm |
BCECF pH 9.0 | 501 nm |
SBFI-Na+ | 336 nm |
Fluo-3 Ca2+ | 506 nm |
Rhodamine 123, MeOH | 507 nm |
FlAsH | 509 nm |
Calcium Green-1 Ca2+ | 506 nm |
Magnesium Green | 507 nm |
DM-NERF pH 4.0 | 493 nm |
Calcium Green | 506 nm |
Citrine | 515 nm |
LysoSensor Yellow pH 9.0 | 335 nm |
TO-PRO-1-DNA | 515 nm |
Magnesium Green Mg2+ | 507 nm |
Sodium Green Na+ | 507 nm |
TOTO-1-DNA | 514 nm |
Oregon Green 514 | 512 nm |
Oregon Green 514 antibody conjugate pH 8.0 | 513 nm |
NBD-X | 466 nm |
DM-NERF pH 7.0 | 509 nm |
NBD-X, MeOH | 467 nm |
CI-NERF pH 6.0 | 513 nm |
Alexa 430 | 431 nm |
Alexa Fluor 430 antibody conjugate pH 7.2 | 431 nm |
CI-NERF pH 2.5 | 504 nm |
Lucifer Yellow, CH | 428 nm |
LysoSensor Yellow pH 3.0 | 389 nm |
6-TET, SE pH 9.0 | 521 nm |
Eosin antibody conjugate pH 8.0 | 525 nm |
Eosin | 524 nm |
6-Carboxyrhodamine 6G pH 7.0 | 526 nm |
6-Carboxyrhodamine 6G, hydrochloride | 525 nm |
Bodipy R6G SE | 528 nm |
BODIPY R6G, MeOH | 528 nm |
6 JOE | 520 nm |
Cascade Yellow antibody conjugate pH 8.0 | 399 nm |
Cascade Yellow | 399 nm |
mBanana | 540 nm |
Alexa Fluor 532 antibody conjugate pH 7.2 | 528 nm |
Alexa 532 | 528 nm |
Erythrosin-5-isothiocyanate pH 9.0 | 533 nm |
6-HEX, SE pH 9.0 | 534 nm |
mOrange | 548 nm |
mHoneydew | 478 nm |
Cy 3 | 549 nm |
Rhodamine B | 543 nm |
DiI | 551 nm |
5-TAMRA-MeOH | 543 nm |
Alexa 555 | 553 nm |
Alexa Fluor 555 antibody conjugate pH 7.2 | 553 nm |
DyLight 549 | 555 nm |
BODIPY TMR-X, SE | 544 nm |
BODIPY TMR-X, MeOH | 544 nm |
PO-PRO-3-DNA | 539 nm |
PO-PRO-3 | 539 nm |
Rhodamine | 551 nm |
Bodipy TMR-X conjugate | 544 nm |
POPO-3 | 533 nm |
Alexa 546 | 562 nm |
BODIPY TMR-X antibody conjugate pH 7.2 | 544 nm |
Calcium Orange Ca2+ | 549 nm |
TRITC | 550 nm |
Calcium Orange | 549 nm |
Rhodaminephalloidin pH 7.0 | 558 nm |
MitoTracker Orange | 551 nm |
MitoTracker Orange, MeOH | 551 nm |
Phycoerythrin | 565 nm |
Magnesium Orange | 550 nm |
R-Phycoerythrin pH 7.5 | 565 nm |
5-TAMRA pH 7.0 | 553 nm |
5-TAMRA | 549 nm |
Rhod-2 | 552 nm |
FM 1-43 | 472 nm |
Rhod-2 Ca2+ | 553 nm |
Tetramethylrhodamine antibody conjugate pH 8.0 | 552 nm |
FM 1-43 lipid | 473 nm |
LOLO-1-DNA | 568 nm |
dTomato | 554 nm |
DsRed | 563 nm |
Dapoxyl (2-aminoethyl) sulfonamide | 372 nm |
Tetramethylrhodamine dextran pH 7.0 | 555 nm |
Fluor-Ruby | 554 nm |
Resorufin | 571 nm |
Resorufin pH 9.0 | 571 nm |
mTangerine | 568 nm |
LysoTracker Red | 578 nm |
Lissaminerhodamine | 572 nm |
Cy 3.5 | 578 nm |
Rhodamine Red-X antibody conjugate pH 8.0 | 573 nm |
Sulforhodamine 101, EtOH | 578 nm |
JC-1 pH 8.2 | 593 nm |
JC-1 | 592 nm |
mStrawberry | 575 nm |
MitoTracker Red | 578 nm |
MitoTracker Red, MeOH | 578 nm |
X-Rhod-1 Ca2+ | 580 nm |
Alexa Fluor 568 antibody conjugate pH 7.2 | 579 nm |
Alexa 568 | 576 nm |
5-ROX pH 7.0 | 578 nm |
5-ROX (5-Carboxy-X-rhodamine, triethylammonium salt) | 578 nm |
BO-PRO-3-DNA | 574 nm |
BOPRO-3 | 574 nm |
BOBO-3-DNA | 570 nm |
Ethidium Bromide | 524 nm |
ReAsH | 597 nm |
Calcium Crimson | 589 nm |
Calcium Crimson Ca2+ | 590 nm |
mRFP | 585 nm |
mCherry | 587 nm |
Texas Red-X antibody conjugate pH 7.2 | 596 nm |
HcRed | 590 nm |
DyLight 594 | 592 nm |
Ethidium homodimer-1-DNA | 528 nm |
Ethidiumhomodimer | 528 nm |
Propidium Iodide | 538 nm |
SYPRO Ruby | 467 nm |
Propidium Iodide-DNA | 538 nm |
Alexa 594 | 590 nm |
BODIPY TR-X, SE | 588 nm |
BODIPY TR-X, MeOH | 588 nm |
BODIPY TR-X phallacidin pH 7.0 | 590 nm |
Alexa Fluor 610 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2 | 567 nm |
YO-PRO-3-DNA | 613 nm |
Di-8 ANEPPS | 469 nm |
Di-8-ANEPPS-lipid | 469 nm |
YOYO-3-DNA | 612 nm |
Nile Red-lipid | 553 nm |
Nile Red | 559 nm |
DyLight 633 | 624 nm |
mPlum | 587 nm |
TO-PRO-3-DNA | 642 nm |
DDAO pH 9.0 | 648 nm |
Fura Red, high Ca | 434 nm |
Allophycocyanin pH 7.5 | 651 nm |
APC (allophycocyanin) | 650 nm |
Nile Blue, EtOH | 631 nm |
TOTO-3-DNA | 642 nm |
Cy 5 | 646 nm |
BODIPY 650/665-X, MeOH | 646 nm |
Alexa Fluor 647 R-phycoerythrin streptavidin pH 7.2 | 569 nm |
DyLight 649 | 652 nm |
Alexa Fluor 647 antibody conjugate pH 7.2 | 653 nm |
Alexa 647 | 653 nm |
Fura Red Ca2+ | 435 nm |
Atto 647 | 644 nm |
Fura Red, low Ca | 472 nm |
Carboxynaphthofluorescein pH 10.0 | 600 nm |
Alexa 660 | 664 nm |
Alexa Fluor 660 antibody conjugate pH 7.2 | 663 nm |
Cy 5.5 | 673 nm |
Alexa Fluor 680 antibody conjugate pH 7.2 | 679 nm |
Alexa 680 | 679 nm |
DyLight 680 | 678 nm |
Alexa Fluor 700 antibody conjugate pH 7.2 | 696 nm |
Alexa 700 | 696 nm |
FM 4-64, 2% CHAPS | 506 nm |
FM 4-64 | 508 nm |
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