用Fucci進(jìn)行口腔上皮細(xì)胞系（Ca 9-22）的細(xì)胞周期觀察

■基于延時(shí)拍攝成像的細(xì)胞周期觀察事例

Fucci（Fluorescent Ubiquitination-based Cell Cycle Indicator）是一種能夠?qū)?xì)胞周期進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)有效監(jiān)控的熒光探針。利用基恩士的一體化熒光顯微成像系統(tǒng)BZ-X，對(duì)已導(dǎo)入Fucci的口腔上皮細(xì)胞系（Ca 9-22）進(jìn)行拍攝，期間以30分鐘為間隔，進(jìn)行了120次、共計(jì)60小時(shí)的延時(shí)拍攝成像。
利用多點(diǎn)拍攝功能，以30分鐘為間隔，對(duì)6孔培養(yǎng)板的各培養(yǎng)孔，進(jìn)行單次3點(diǎn)，共計(jì)18點(diǎn)的連續(xù)拍攝。

圖片/視頻來源：
新潟大學(xué)醫(yī)學(xué)部
基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)系 顯微解剖學(xué)（解剖學(xué)第3講座）
三上剛和 先生

■細(xì)胞周期觀察中的問題點(diǎn)

在用活細(xì)胞（Live cell）進(jìn)行長時(shí)間延時(shí)拍攝成像的過程中，必須始終維持恒定的溫度、CO2濃度和濕度。解決上述問題的簡易方法，就是掐準(zhǔn)拍攝時(shí)機(jī)，僅在拍攝時(shí)將標(biāo)本從恒溫箱中取出，進(jìn)行拍攝。但是這種方法又會(huì)衍生出“難以再現(xiàn)拍攝位置”、“移動(dòng)標(biāo)本會(huì)改變其狀態(tài)，存在污染風(fēng)險(xiǎn)”、“每次拍攝時(shí)都要進(jìn)行人工維護(hù)”等諸多問題。

一體化熒光顯微成像系統(tǒng)BZ-X采用臺(tái)面式小型恒溫箱，能夠在維持標(biāo)本環(huán)境恒定的同時(shí)，進(jìn)行指定次數(shù)的自動(dòng)拍攝。還能借助多點(diǎn)多條件拍攝功能，在改變倍率、濾光片等拍攝條件的同時(shí)，進(jìn)行多點(diǎn)拍攝，只需以簡單操作進(jìn)行延時(shí)拍攝成像，就能以超高的效率，加快推動(dòng)實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

★如果引進(jìn)一體化熒光顯微成像系統(tǒng)BZ-X

·       全電動(dòng)控制，操作簡單便捷。無需暗室，可以在臺(tái)面上安裝小型恒溫箱，輕松實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞成像。

·       利用由制冷相機(jī)和專用鏡頭構(gòu)成的高靈敏度光學(xué)系統(tǒng)，能夠在盡量減少細(xì)胞損傷的同時(shí)，獲取高精細(xì)的熒光圖像。

·       能夠一次性對(duì)多個(gè)標(biāo)本進(jìn)行延時(shí)拍攝，便于開展相同條件下的比較檢驗(yàn)。

■什么是Fucci？

Fucci技術(shù)用發(fā)出紅色熒光的mKO2（monomeric Kusabira-Orange2）熒光蛋白質(zhì)，結(jié)合G1期（分裂結(jié)束后，細(xì)胞開始為DNA復(fù)制做準(zhǔn)備的時(shí)期）增長量超大的Cdt1，再用發(fā)出綠色熒光的mAG（monomeric Azami-Green1）熒光蛋白質(zhì)，與Geminin（在從DNA復(fù)制到細(xì)胞分裂前的S/G2/M期的增長量超大）相結(jié)合，就能實(shí)現(xiàn)細(xì)胞周期進(jìn)程的可視化，對(duì)DNA復(fù)制及細(xì)胞分裂的情況進(jìn)行實(shí)時(shí)觀察。
自2008年開發(fā)以來，F(xiàn)ucci技術(shù)就在不斷改良，陸續(xù)推出了對(duì)細(xì)胞核內(nèi)及細(xì)胞整體進(jìn)行Fucci信號(hào)標(biāo)記的Fucci（N+C）；在熒光蛋白質(zhì)中應(yīng)用mCherry和mVenus，使G1期和S/G2/M期更易分離的Fucci2；還有追加細(xì)胞周期間期（G1、S、G2期）識(shí)別能力，借此辨識(shí)4種細(xì)胞周期的Fucci（CA）等等。如今，F(xiàn)ucci技術(shù)已經(jīng)被廣泛用于發(fā)生學(xué)、再生醫(yī)學(xué)、癌腫瘤學(xué)等領(lǐng)域，研究與細(xì)胞周期息息相關(guān)的各類生命現(xiàn)象。

基恩士 一體化熒光顯微成像系統(tǒng) BZ-X1000系列，

在醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛。

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