RNAscope®技術由美國Advanced Cell Diagnostics（ACD）公司于2012年推出，是RNA原位雜交（ISH）領域的革命性突破。該技術通過獨特的雙Z探針設計和級聯信號放大系統，實現了單細胞水平上單個RNA分子的可視化與精確定量，解決了傳統PCR和原位雜交技術無法兼顧“原位信息”與“高靈敏度”的痛點。  

 一、技術原理：雙Z探針如何攻克原位雜交的世紀難題？  

1. 探針設計：特異性與靈敏度的平衡藝術  

   每個目標RNA對應專屬的Z形探針，每對探針由兩條獨立序列構成：  

     - 底部：18-25個堿基，精準互補結合目標RNA；  

     - 頂端：雙探針拼接成28個堿基的結合域，用于捕獲信號放大前體序列。  

    創新性要求兩探針必須緊鄰結合才能觸發信號，將非特異性結合導致的背景噪音降至近乎為零。  

2. 信號放大：分子“多米諾骨牌”效應  

   信號生成通過四級級聯放大實現：  最終每個RNA分子在顯微鏡下呈現為一個清晰可辨的點狀信號，實現單分子定量。  

 二、性能優勢：為何頂·級藥企與期刊紛紛青睞？  

超高靈敏度：僅需3對探針結合即可檢測單個RNA分子，即使目標RNA部分降解（如FFPE樣本）仍可穩定檢出；  

多重檢測能力：單張切片上同步檢測3種RNA（熒光法）或2種RNA（顯色法），并可聯合蛋白共標；  

全流程高效：手工操作僅需2.5小時，兼容石蠟切片、冰凍組織及細胞樣本；    

 三、應用場景：從腫瘤微環境到基因治療  

1. 腫瘤免疫治療研究的“隱形顯微鏡”  

    解析PD-1/PD-L1等免疫檢查點在腫瘤細胞與T細胞間的空間分布；  

    追蹤細胞因子mRNA（如IL-2、IFN-γ）在腫瘤微環境中的分泌來源。  

2. 神經科學：繪制腦中的RNA地圖  

    可視化神經元內低豐度非編碼RNA（如lncRNA）的亞定位；  

追蹤神經活性標志物（如c-fos）的動態表達。

3. 病毒與宿主博弈的見證者  

    直接觀察HPV、HIV等病毒RNA在宿主細胞內的復制位點，為抗病毒·藥物提供靶點證據。  

4. 藥物開發全周期護航  

    靶點驗證：確認候選藥物作用靶標的組織分布；  

    臨床前安全評價：檢測藥物是否在非靶器官（如心臟、肝臟）誘發毒性RNA表達。  

 四、技術進化：空間多組學時代的領·跑者  

2023年，ACD進一步推出多靶標原位共檢方案，已成為單細胞測序數據原位驗證的核心工具，推動“空間多組學”在腫瘤異質性研究中的應用。  

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