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食品中抗壞血酸檢測：L型與D型如何精準測定？
L-抗壞血酸又名維生素C，是一種水溶性維生素，具有很強的還原性。參與機體復雜的代謝過程，能促進生長和增強對疾病的抵抗力，可用作營養增補劑、抗氧化劑，也可用作小麥粉改良劑。D-異抗壞血酸與L-抗壞血酸有相似的化學性質，屬于水溶性抗氧化劑。D-異抗壞血酸可以防止肉類制品、魚肉制品、鯨肉制品、魚貝腌制品、魚貝冷凍品等的變質，或與亞硝酸鹽、硝酸鹽合用提高肉類制品的發色效果。但L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸的過量補充對健康無益，反而有害，會刺激胃腸道、引起尿路結石和誘發痛風，故需要合理使用。本方案參考《GB 5009.86-2025 食品中抗壞血酸的測定》，對某品牌的可樂進行了抗壞血酸含量的測定。
P60輸液泵、A10C自動進樣器、C10柱溫箱、D10紫外檢測器
L-抗壞血酸標準溶液（50 μg/mL）：準確稱取L-抗壞血酸標準品10 mg(精確至0.1 mg)，用TCEP溶液溶解并定容至10mL，混勻。準確吸取上述標準溶液500 μL于10 mL棕色容量瓶中，用TCEP溶液定容，混勻。將溶液轉移至棕色玻璃容器中。臨用現配。
D-異抗壞血酸標準溶液（50 μg/mL）：準確稱取D-異抗壞血酸標準品10 mg(精確至0.1 mg)，用TCEP溶液溶解并定容至10mL，混勻。準確吸取上述標準溶液500 μL于10 mL棕色容量瓶中，用TCEP溶液定容，混勻。將溶液轉移至棕色玻璃容器中。臨用現配。
標準工作溶液配制：分別準確吸取L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸標準溶液（50 μg/mL）適量，用流動相稀釋成標準工作溶液，濃度分別為0.05 μg/mL、0.5 μg/mL、1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10 μg/mL。臨用現配。
色譜柱：Lotus C18（4.6 mm*150 mm，5 μm）
柱溫：30 ℃
進樣體積：20 μL
波長：265 nm
流動相：量取水900 mL于燒杯中，吸取40% TBAH溶液3.25 mL、稱取乙酸銨3.85 g置于水中，然后加入TCEP 50 mg(或L-半胱氨酸溶液20 mL)，再加入乙腈 10 mL，混勻后用冰乙酸（約3.14 mL）調pH至 4.5~5.0；最后加水稀釋至1L，混勻；超聲除去氣泡。
流速：1.0 mL/min
如圖1所示，L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸對稱因子均為1.1，分離度達到1.9。
圖1 L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸標準溶液色譜圖
（1—L-抗壞血酸； 2—D-異抗壞血酸）
表1 L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸標準曲線結果表
將2 μg/mL濃度的標準溶液進樣6次，重復性結果如表2所示
表2 L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸重復性結果表
對某品牌的可樂進行樣本處理測試，L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸均未檢出。在可樂樣品中添加濃度為1 μg/mL的抗壞血酸，L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸的回收率分別為109%和111%。
圖2 L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸加標溶液色譜圖
本應用使用Leaps超高效液相色譜儀，參考《GB 5009.86-2025 食品中抗壞血酸的測定》進行了方法學考察，線性相關系數大于0.999；L-抗壞血酸保留時間重復性為0.11%，峰面積重復性為0.39%，D-異抗壞血酸保留時間重復性為0.11%，峰面積重復性為0.90%；可樂樣品中L-抗壞血酸加標回收率為109%，D-異抗壞血酸加標回收率為111%。儀器操作簡單，穩定性好，靈敏度高，滿足食品中L-抗壞血酸和D-異抗壞血酸含量的測定要求。
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