漢坦病毒熒光定量PCR檢測方案
1951-1953年3000多名士兵感染了一種急性發熱同時伴腎功能衰竭以致休克的疾病,該病發生于漢坦河流域,因此以“漢坦”命名。直到1976年,韓國李鎬汪從黑線姬鼠的肺組織中分離出了漢坦病毒。
漢坦病毒(Hantavirus, HV)屬于布尼亞病毒科家族,是有包膜分節段的單股負鏈RNA病毒。病毒顆粒多數呈圓形或卵圓形,直徑大小為為80~120nm。漢坦病毒的基因組由三個基因片段組成,分別是小(S)?中(M)和大(L) 3個片段,每個片段分別編碼病毒的核衣殼蛋白(NP)?糖蛋白(GP)的G1和G2?RNA聚合酶。正漢坦病毒屬可感染人類并致病。宿主是嚙齒動物(鼠、田鼠、棉鼠等)。也可感染人類,引發腎綜合征出血熱(HFRS)與漢坦病毒肺綜合征(HPS)。感染人類病毒代表種:是漢灘病毒(HTNV)、漢城病毒(SEOV)等。
漢坦病毒的PCR 檢測是RT - PCR(逆轉錄 PCR),包括普通 RT - PCR、實時熒光 RT - PCR。RT - PCR:先以逆轉錄酶將病毒 RNA 反轉錄為 cDNA,再用引物擴增漢坦病毒片段,通過電泳判讀產物。實時熒光 RT - PCR:在 RT - PCR 體系中加入TaqMan 探針,擴增時熒光信號累積,通過Ct 值定量和定性判斷。
翼和生物漢坦病毒HANT、小鼠肺炎病毒PVM、小鼠細 小病毒MVM多重qPCR鑒別試劑盒,在必檢病毒聯檢試劑盒 的基礎上設計,用于對檢出的陽性樣本進一步確認所感染的病毒。
試劑盒采用多套引物探針,在FAM(漢坦病毒HANT),HEX(小鼠肺炎病毒PVM),ROX(小鼠細小病毒MVM)三個通道檢測3種病毒,另外一套引物探針在CY5通道檢測內參RNA。該試劑盒具有以下特點:
靈敏:檢測靈敏度較高,10 copies/μL可被有效檢出。
穩定:全程閉管操作,無交叉污染。
可靠:含內參基因,避免假陰性。
方便:操作簡單,一步法檢測。
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