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HS-D-5800P帶您解碼Oligo制備純化
從 siRNA、ASO 到 mRNA 相關功能序列，寡核苷酸（Oligo）正在成為創新藥研發中的關鍵分子工具。但在研發推進過程中，真正決定篩選效率與結果可信度的，往往不是“能不能合成”，而是“能不能快速拿到足量、高純度、可重復的樣品”。對研發團隊而言，一套兼顧分離效率、方法靈活性、收集準確性與高通量排樣能力的制備平臺，已經成為 Oligo 純化環節的重要支撐。
HS-D-5800P 制備型高壓液相色譜系統具備 0–40 MPa 系統耐壓、1–150 mL/min 流速范圍，標配 UV-VIS 200–800 nm 雙波長檢測器，并可選配 ELSD。系統采用分體式自動進樣器與分體式二維餾分收集器設計，支持多規格樣品管與試管架配置，同時可擴展 5 mL 至 20 mL 定量環，兼顧方法開發、小試放大與高通量制備。
本次應用中為 50 OD 的 20nt Oligo粗品，樣品以 1 mL 水溶解后，經 0.22 μm 濾膜過濾。
粗品分析
色譜柱：Kinetex EVO C18, 2.6µm, 4.6×150mm
流動相A：水（400mM HFIP和16mMTEA）
流動相B：甲醇
檢測器：260 nm
流 速：1.0 mL/min
柱 溫：30℃
梯 度：
制備條件采用 Kinetex EVO C18 5 μm 10×150 mm AXIA制備柱，流動相 A 為含 400 mM HFIP 與 16 mM TEA 的水相，流動相 B 為甲醇，流速 4 mL/min，檢測波長設置為 260 nm（主檢測）與 280 nm（監測），進樣量 50 OD。
檢測結果
主峰 34.5–37.0 min 區間收集后，檢測純度可達到 97%。
其中后段主峰 35.7–37.0 min 餾分，檢測純度可達到 99.7%。
HS-D-5800P 的序列排樣搭配核殼類高柱效的制備柱，可用于 Oligo 樣品的高純度制備分離，為后續生物學評價提供可靠樣品基礎。
重視樣品過濾與流動相脫氣
樣品溶解后建議過濾，以降低顆粒污染、異常壓力波動和峰形異常風險；HFIP/TEA 類流動相應充分脫氣，并盡量減少與空氣長期接觸；若發現水相吸液端易夾帶氣泡或基線不穩，可結合系統情況優化吸液方式，并在檢測器后端適當增加背壓以提高信號穩定性。
關注延遲體積對收集窗口的影響
在 10 mm 半制備柱、較低流速等條件下，檢測器至收集模塊之間的延遲體積對應的延遲時間會更明顯，但會準確繞讓過延遲體積，精準收集目標峰。
推薦采用“三明治進樣”優化上樣表現
由于 Oligo 極性較大、保留相對較弱，建議關注樣品溶劑與初始流動相的匹配。必要時可采用三明治進樣（稀釋進樣）以改善峰形和進樣重現性。若采用定量環滿環進樣，應保證總吸樣體積充滿定量環。例如 5 mL 定量環可采用：流動相 A 3000 μL + 樣品 1000 μL + 流動相 A 1000 μL。
有機相選擇要與離子對體系匹配
在HFIP添加濃度較高、且流動相處于富水或特定配比時，乙腈可能帶來相分離/混濁風險，方法開發前應先驗證流動相相容性；若體系穩定性不足，優先考慮使用甲醇作為有機相。對存在明顯二級結構或分離難度較高的 Oligo 樣品，可結合序列特點進一步考察柱溫、離子對試劑濃度和梯度斜率，以提升分離度與方法穩定性。
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