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CytoFLEX mosaic光譜流式應用于PLA微囊疫苗研究
疫苗是守護人類健康的重要武器，而佐劑則是決定疫苗“戰斗力”的關鍵部件。傳統鋁佐劑雖能有效激活體液免疫，卻在細胞免疫方面存在局限。近日，來自中國的研究團隊利用聚乳酸（PLA）微囊技術構建了時空耦合的新型復合佐劑遞送系統，成功實現了體液與細胞免疫的協同增強。該成果發表于國際期刊《Pharmaceutics》。研究中，CytoFLEX mosaic光譜流式分析儀為解析復雜的細胞免疫機制提供了關鍵數據支持。
研究亮點速覽：
時空協同遞送的PLA微囊
研究團隊利用復乳法制備了尺寸均一的PLA微囊（4-5 μm），并將模式抗原卵清蛋白（OVA）與小分子免疫佐劑單磷酰脂質A（MPLA）共負載其中。表面免疫增強劑率先激活免疫識別，內部抗原被高效遞呈，實現了時空耦合的免疫遞送。
實驗結果顯示，共裝載OVA和MPLA的PLA微囊（OVA&MPLA@MC）不僅誘導了高水平的IgG抗體，更顯著增強了Th1偏向的細胞免疫應答。
CytoFLEX mosaic
助力高維解析T細胞應答
細胞免疫的評估需要精確測定T細胞的活化狀態和效應功能。面對脾臟中復雜的免疫細胞群體，傳統流式在多色實驗中常受困于熒光光譜重疊。本研究啟用CytoFLEX mosaic光譜流式分析儀，輕松化解了這一難題。
多參數全景分析，一管知“免疫”
研究人員設計了包含表面標志物（CD45、CD3、CD69、MHC II）和胞內效應分子（Granzyme B、IL-2）的多色方案。通過CytExpert for Spectral軟件進行數據采集和分析，CytoFLEX mosaic憑借其高參數檢測能力，一次上樣即可獲得單個T細胞的完整功能畫像。
結果直擊：CytoFLEX mosaic數據顯示，OVA&MPLA@MC組中CD3? T細胞中Granzyme B（殺傷主力）和IL-2（生長因子）表達水平顯著提升，直觀證明了疫苗誘導提升脾臟T細胞的活化水平與細胞毒活性（圖1B和圖2A、C）。
圖1：疫苗誘導的小鼠脾細胞免疫應答評價。（A）OVA特異性IFN-γ分泌脾細胞的代表性斑點圖及ELISpot檢測定量結果。（B）光譜流式細胞術檢測CD3? T細胞中Gzmb?細胞比例，用于表征細胞毒活性。（C）Cytobank計算生成的CD69與MHC II表達水平的代表性t-SNE圖。顏色深淺代表標志物表達水平。數據（n=3）以均值±標準誤（SEM）表示。
圖2：CD3? T細胞中IL-2的表達水平。（A）CD3? T細胞中IL-2?細胞比例，用于表征多功能T細胞。數據（n=3）以均值±標準誤（SEM）表示。（B）用于鑒定T細胞的圈門策略。（C）與（A）中各組相對應的CD3? T細胞中IL-2陽性細胞的代表性流式點圖。
光譜解析，數據去偽存真
CytoFLEX mosaic搭載先進的混合泊松光譜解析算法，能夠精準區分光譜高度相似的熒光染料，有效去除背景熒光干擾。在檢測活化標志物CD69等低表達分子時，信噪比高，有助于弱陽性信號的準確識別。
聯動Cytobank進行降維分析
面對高維流式數據，研究團隊將CytoFLEX mosaic采集的光譜數據導入Cytobank v10.7軟件進行t-SNE降維可視化分析。Cytobank憑借其云端算法，清晰展示了不同疫苗組間免疫細胞亞群的分布差異。
Cytobank生成的t-SNE圖譜顯示，OVA&MPLA@MC組在CD3? T細胞群體中呈現出明顯的活化標志物（CD69、MHC II）高表達聚集區，而傳統佐劑組則分布相對稀疏，為疫苗增強細胞免疫的結論提供了直觀的可視化依據（圖1C）。
技術視角：光譜流式
在復雜免疫評價中的應用
通過本研究，我們可以看到CytoFLEX mosaic與Cytobank的組合在疫苗研發中的實用價值：
CytoFLEX mosaic硬件保障：優秀的硬件性能帶來高靈敏度，可捕捉活化初期微弱的受體表達變化，滿足從巨噬細胞表型到T細胞胞內因子的多色檢測需求。
CytExpert for Spectral軟件算法加持：操作界面直觀，內置混合泊松光譜解析算法，無需復雜的手動補償調節即可完成多色數據解析，有助于降低數據擴散誤差，提升微弱信號與精細亞群的分辨能力。
Cytobank軟件賦能：無縫對接CytoFLEX mosaic原始數據，利用云計算資源實現t-SNE等降維分析，將復雜的熒光信號轉化為直觀的生物學信息，便于挖掘隱藏的免疫亞群特征。
參考文獻
Guan S, Zhang Y, Liu H, et al. Engineered Polylactic Acid (PLA) Microcapsules for Spatiotemporally Coupled Delivery and Synergistically Enhanced Dual Immunity. Pharmaceutics, 2026, 18(4): 456.
DOI: 10.3390/pharmaceutics
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