【導語】

固相萃取（SPE）看似簡單——活化、上樣、淋洗、洗脫，四步搞定。

但實際做下來，回收率低、重現性差、峰形異常……問題往往不在柱子，而在操作細節。

以下這5個常見“坑”，看看你有沒有踩過 ??

? 錯誤一：活化/平衡溶劑用量或順序不對

常見問題：

·       只用甲醇活化，忘了用上樣緩沖液平衡；

·       活化后柱床干涸（空氣進入填料）；

·       有機相比例與上樣液差異過大，未重新平衡。

正確做法：

·       先用強洗脫溶劑（如甲醇）潤濕填料；

·       再用與上樣液相同 pH / 離子強度 / 有機相比例 的緩沖液平衡；

·       保持液面始終高于填料，防止柱床干裂。

?? 柱床一干，回收率基本就廢了。

? 錯誤二：上樣體積過大或流速太快

常見問題：

·       為省時間加大流速（> 1–2 mL/min）；

·       上樣體積遠超柱容量（尤其是 HLB/C18 小柱）。

正確做法：

·       參考廠家給出的吸附容量（mg/g），推算最大上樣量；

·       上樣流速一般控制在 1 mL/min 左右；

·       必要時分次上樣或選用大容量柱。

?? 過柱≠倒水，吸附是需要時間的。

? 錯誤三：樣品 pH / 離子強度未優化

常見問題：

·       忽略目標物 pKa，導致電離態不利于吸附；

·       水樣直接上機，未調節 pH 或未加鹽（離子強度影響保留）。

正確做法：

·       酸性化合物 → 酸性條件下（分子態）更易保留于 C18/HLB；

·       堿性化合物 → 堿性條件；

·       必要時加 NaCl 抑制極性干擾物。

?? SPE 不是萬能捕手，pH 決定留不留得住。

? 錯誤四：淋洗步驟“過度清洗”或“洗太輕”

常見問題：

·       淋洗液中有機相偏高 → 把目標物一并洗掉；

·       淋洗不足 → 基質干擾殘留，色譜出現雜峰。

正確做法：

·       淋洗液目的是去除基質干擾但不洗脫目標物；

·       做方法驗證時，建議做淋洗強度梯度實驗確認安全窗口。

?? 淋洗是 SPE 里最容易被忽視、也最影響選擇性的步驟。

? 錯誤五：洗脫溶劑種類/體積不匹配

常見問題：

·       洗脫能力偏弱（如只用 30% 甲醇洗強保留物）；

·       洗脫體積過小，未完整將目標物洗下。

正確做法：

·       通常先用 高有機（甲醇/乙腈）→ 必要時加酸/堿/氨水改性；

·       分次洗脫（如 2×1 mL 優于 1×2 mL）；

·       收集洗脫液后可氮吹復溶至確定體積。

?? 洗不下來 ≠ 沒吸附，可能是洗脫條件不夠“狠”。

? 小結

SPE 成功 = 合適的柱型 + 正確的活化平衡 + 優化的 pH/離子強度 + 合理流速 + 驗證過的淋洗/洗脫條件。

新手常犯的錯，大多集中在前三步。

把細節做對，回收率和 RSD 自然會乖乖聽話。

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