人脂肪來源的干細胞原代分離培養操作方案
具體流程如下:
1. 取臨床來源人體脂肪組織稱重,添加含 2% 雙抗的 PBS 溶液洗滌 3 次;
2. 無菌條件下使用眼科剪,將脂肪組織剪至體積約 1mm3的細小組織塊;
3. 加入5mL I型膠原酶,置于 37℃、80rpm 搖床消化 50~60 min;
4. 加入等體積wan全培養基中和膠原酶,終止消化反應;
5. 采用 70μm細胞篩過濾懸液,除去未充分消化的結締組織與細胞團;
6. 室溫條件下 1800 rpm 離心 10 min;
7. 離心后上層漂浮大量脂滴,先用吸管吸取大部分脂滴,再棄去全部上清;
8. 配制wan全培養基(DMEM/F12 + 10% 胎牛血清 FBS + 1% 雙抗)重懸細胞沉淀;
9. 細胞懸液接種至培養器皿進行培養;
10. 接種 48 h 后進行換液;
11. 后續常規每周更換 2 次培養液;
12. 持續培養 7~10 d,脂肪干細胞逐步達到細胞融合狀態。

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