一、為什么要做平板劃線？

核心目的只有一個：把混雜在一起的細菌，分離成單個菌落（純培養）。

具體作用：

獲得單菌落—— 只有單菌落才是純種細菌，才能做鑒定、保種、做實驗。

純化菌種—— 去掉雜菌，得到單一菌株。

計數/觀察形態—— 單菌落才能看大小、顏色、邊緣、質地。

一句話總結：不劃線，就分不出純種菌，后面實驗全白做。

二、平板劃線怎么做？（標準四區劃線法）

我給你寫成實驗室最標準的操作步驟，照著做就能成功。

1、準備工作

滅菌好的瓊脂平板（凝固、表面干燥）

接種環、酒精燈、待分離的菌液/菌苔

超凈臺/無菌環境

2、點燃酒精燈，在火焰旁操作

所有操作都在火焰無菌區內！

3、灼燒接種環

接種環在火焰上燒紅滅菌

冷卻（碰一下培養基邊緣，避免燙死菌）

4、取菌

用冷卻好的接種環蘸取一環菌液

（或刮取少量菌苔）

5、一區劃線（密集區）

在平板1/4 區域內輕輕劃線

線條密、短、平行，不要劃破瓊脂

6、再次灼燒接種環

滅菌，只帶走極少量菌

7、二區劃線

從一區末端開始，往二區劃線

線條比一區疏一點

8、再次灼燒 → 三區劃線

從二區末端劃向三區

9、再次灼燒 → 四區劃線

從三區末端劃向四區

四區線條最稀疏，目的就是出單菌落

10、完成后

接種環再次灼燒滅菌

平板倒置（防止冷凝水滴下沖散菌落）

放入培養箱培養

三、成功的關鍵（必看）

不能劃破培養基，否則細菌長到縫里，分不出來。

每劃完一個區必須燒環，才能逐級稀釋。

劃線要輕、快、密而不亂。

平板表面必須干燥，水太多會連成一片。

四、最終效果

一區：菌最多，一片菌苔

二區：菌減少

三區：更少

四區：出現清晰、獨立的單菌落

五、平板劃線的注意事項

下面整理的考試、實驗操作都能用的平板劃線注意事項，直接背、直接用：

全程無菌操作必須在酒精燈火焰旁/超凈臺內進行，防止雜菌污染。

接種環先滅菌、再冷卻灼燒至發紅，冷卻后再取菌，避免燙死菌種。

取菌量要少只需蘸取少量菌液/菌苔，太多容易長一片分不開。

劃線動作要輕，不能劃破瓊脂劃破后細菌會沿縫隙生長，得不到單菌落。

每劃完一個區必須灼燒接種環目的是逐級稀釋，保證后面區域菌量越來越少。

下一區要從上一區末端開始劃線只帶過去少量菌，不要重新蘸菌。

線條要密、平行、不重疊、不亂畫提高分離出單菌落的概率。

培養時平板必須倒置防止冷凝水滴落，沖散菌落、造成污染。

劃線結束后再次滅菌接種環避免殘留菌種污染環境。

平板表面要干燥有水會導致菌落融合，無法分離單菌落。

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