離心機提取血清怎樣使用
離心機提取血清怎樣使用
用離心機提取血清,是實驗室里非常基礎的操作。它的核心不在于離心的轉速有多高,而在于讓血液在離心前充分凝固,然后在合適的離心力下將血清和血細胞分開。
一、血清提取的標準操作
1.離心前的關鍵:等待血液凝固
這是決定血清質量很關鍵的一步,但常被忽略。將血液采集到無抗凝劑的干燥管或促凝管中(通常是紅頭或黃頭管),然后在室溫下靜置20-30分鐘,讓血液自然凝固。可以觀察到 血形成并收縮,有淡黃色的血清滲出時,就可以離心了。凝固不充分就離心,殘存的纖維蛋白會形成膠凍狀物,影響血清分離。
2.精確配平:安全是底線
將采血管放入離心機前,需要用天平進行精確配平。確保對稱位置的采血管(可加上同等重量的平衡管)重量差在0.1克以內。不平衡是離心機事故的主要原因。
3.設置參數并離心
離心力:通常為1500-2000xg。
時間:10-15分鐘。
溫度:室溫,如果是為了檢測不穩定的代謝物,則設為4℃。
4.小心分離血清
離心后,血細胞沉在管底,上層清液就是血清。用移液器小心吸取上清,槍頭不要觸碰到下方的血細胞層。如果覺得一次離心后的血清不夠純凈,可以把它轉移到新管中,再次短暫離心后取上清。
二、操作中的幾個關鍵提醒
采血管別用錯:提取血清要用不含抗凝劑的干燥管或促凝管。如果誤用了含抗凝劑的管,得到的是血漿,而不是血清。
分離血清時不急剎車:離心結束減速時,最好讓轉子自然減速。急剎車會攪動管內的液體,可能導致血細胞層重新懸浮,讓分離好的血清又變渾濁。
避免溶血:溶血會釋放紅細胞內容物,干擾檢測結果。操作時注意:采血過程盡量順暢,離心前確保血充分收縮,分離血清時槍頭不要觸碰血細胞層。
水平與角轉子的區別:水平轉子離心后,血細胞沉淀在管底正中,上清更易分離。角轉子離心后,血細胞積聚在管底外側壁,吸取血清時注意避開沉淀。
總結
簡單來說,用離心機提取血清的過程就是:采血后先等它凝固,配平后1500-2000xg離心10-15分鐘,最后小心吸取上清。如果分離效果不佳,可以先檢查血液凝固是否充分,再考慮調整離心參數。
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