在肝癌基礎(chǔ)研究和新藥研發(fā)中，一個穩(wěn)定可靠的動物模型往往決定了實驗的成敗。相比皮下移植瘤，肝臟原位模型更能模擬腫瘤的真實微環(huán)境、侵襲轉(zhuǎn)移路徑，是藥效評估和機制研究的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”。今天就結(jié)合一線實操經(jīng)驗，為大家梳理小鼠肝臟原位肝癌模型的構(gòu)建策略，幫你少走彎路、高效推進課題。

一、3種主流建模方法，按需選擇不踩雷

目前實驗室廣泛使用的構(gòu)建方案有三種，各有適配場景，可根據(jù)實驗?zāi)康撵`活選擇：

1. 直接注射法：追求速度的優(yōu)先推薦

操作極其簡便：經(jīng)腹腔或直接向肝臟注射50μl H22肝癌細(xì)胞懸液即可，成瘤率可達100%，術(shù)后7天就能觀察到肝臟結(jié)節(jié)，效率可觀。

但它的短板也很明顯：腹水發(fā)生率高達40%~100%，易誘發(fā)重度腹腔粘連和腫瘤轉(zhuǎn)移，更適合短期抗肝癌藥物初篩，不適合長期觀察或轉(zhuǎn)移機制研究。

2. 組織塊移植法：低轉(zhuǎn)移實驗的針對性適配方案

將腫瘤組織塊直接植入肝臟，成瘤率同樣為100%，且腹水和臟器粘連風(fēng)險遠低于直接注射法，能為實驗提供更穩(wěn)定的生理環(huán)境。

針對性的小缺點是操作耗時稍長，平均需要5.68分鐘（直接注射僅需3.3分鐘），適合需要控制轉(zhuǎn)移率、開展長期隨訪的研究。

3. 夾心法：大規(guī)模藥效篩選的神器

專門針對BALB/c裸鼠設(shè)計：異氟烷麻醉后移植腫瘤組織塊，成瘤率高，幾乎不會出現(xiàn)腹腔廣泛種植，動物死亡率極低，非常適合高通量藥效學(xué)評價，一次性測試多種候選藥物也不在話下。

? 快速選型建議

• 要快速成瘤：選直接注射法

• 要低并發(fā)癥、長期觀察：選組織塊法/夾心法

• 要模擬臨床肝癌異質(zhì)性：選基因編輯模型（可通過原位編輯TP53、MYC等肝細(xì)胞基因，構(gòu)建25種異質(zhì)性模型，覆蓋HCC、ICC等臨床分型，匹配M1-M3等分子亞型，支持個體化治療研究）

二、不同場景下的模型應(yīng)用策略

選對模型，實驗就成功了一半，不同研究方向?qū)?yīng)的模型選擇邏輯如下：

1. 藥效評估：直接注射法憑借超高成瘤率和短周期優(yōu)勢，是抗肝癌藥物初篩的優(yōu)先推薦，可大幅縮短新藥研發(fā)的時間成本。

2. 轉(zhuǎn)移機制研究：腹水型H22細(xì)胞注射模型（B組）的肝轉(zhuǎn)移率為40%，能很好地模擬腫瘤侵襲性，是探索肝癌定植、擴散機制的理想工具。

3. 異質(zhì)性與分型研究：基因編輯模型庫可精準(zhǔn)匹配不同分子亞型，助力解析各亞型肝癌的生物學(xué)特性，為個體化治療方案開發(fā)提供依據(jù)。

三、實操案例：H22細(xì)胞原位移植瘤全流程指南

以實驗室廣泛使用的H22小鼠肝癌細(xì)胞原位模型為例，完整操作流程如下：

? 實驗材料準(zhǔn)備

• 實驗動物：SPF級雌性BALB/c裸鼠，6~8周齡，體重18~20g。飼養(yǎng)環(huán)境要求：溫度20~24℃、相對濕度40~70%、噪音<85dB，每周換2次墊料、加4次飼料，購回后適應(yīng)性飼養(yǎng)1周再開展實驗。

• 細(xì)胞株：務(wù)必選擇資質(zhì)合規(guī)的供應(yīng)商，確保細(xì)胞來源可靠、無污染。

? 實驗操作步驟

1. 細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)

37℃水浴復(fù)蘇細(xì)胞（取出凍存管前先檢查是否松動），無菌條件下將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含5ml 10%胎牛血清的RPMI-1640大體培養(yǎng)基中，1000rpm離心5分鐘，棄上清后用新鮮大體培養(yǎng)基重懸，置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每日觀察細(xì)胞狀態(tài)，密度達80%~90%時進行傳代。

2. 原位移植手術(shù)

• 術(shù)前準(zhǔn)備：配制7mg/mL實驗動物專用管制麻醉試劑（Nembutal），按10ml/kg劑量麻醉小鼠；用75%酒精和碘伏消毒手術(shù)區(qū)。

• 手術(shù)操作：超凈臺內(nèi)將小鼠仰臥位固定于鼠板，左腹腔作1cm橫切口，用無菌生理鹽水潤濕的棉簽輕拉肝左葉充分暴露；用25μl微量注射器吸取10μl細(xì)胞懸液（濃度1.5×10?/ml），緩慢注射至肝左葉尾部，針頭停留1~2分鐘再拔出；棉簽按壓止血1~2分鐘后將肝臟復(fù)位，用可降解縫線逐層縫合腹膜和皮膚。術(shù)后將小鼠置于37℃恒溫墊復(fù)蘇，恢復(fù)活動后放回籠中飼養(yǎng)。

3. 造模后觀察

術(shù)后約3周可在小鼠肝區(qū)觸及腫瘤，解剖可見肝臟表面明顯瘤灶。也可使用IVIS Lumina LT活體成像系統(tǒng)采集熒光信號，動態(tài)監(jiān)測腫瘤生長情況，量化評估干預(yù)效果。

小鼠肝臟原位肝癌模型是肝癌研究的核心工具，掌握不同模型的優(yōu)劣勢和標(biāo)準(zhǔn)化操作流程，能讓你的科研工作事半功倍。如果在模型構(gòu)建過程中遇到技術(shù)難點，或是需要定制化模型服務(wù)，歡迎隨時交流探討~