寡核苷酸是由2-30個核苷酸殘基通過磷酸二酯鍵連接而成的短鏈核酸片段，廣泛用于生物治療（包括基因治療、RNA干擾和反義寡核苷酸療法）而備受關注。這些化合物的治療效果高度依賴其純度和結構完整性，因此建立穩健的分析方法對質量控制至關重要。

HPLC法是監控寡核苷酸合成的關鍵技術，能為其純度和結構完整性提供有價值的參考。然而，由于寡核苷酸結構復雜且存在雜質，傳統的HPLC方法在分離寡核苷酸時面臨挑戰。提高 pH 和溫度的條件會進一步增加分離難度，因為傳統全孔顆粒（FPP）色譜柱的硅膠填料通常不適合此類條件。

BIOshell™ A120 Oligo C18色譜柱采用熔融核Fused-Core®顆粒技術，具有快速、高效的特點。表面改性的有機硅烷，具有耐堿性，在使用高pH值分離寡核苷酸時具有優異的穩定性，這項創新技術有助于開發穩健的方法，改善堿性化合物的分離效果。堿性化合物在低 pH 條件下通常峰形不佳、保留不足等問題。BIOshell™色譜柱表面惰性的硬件，很好的解決了樣品吸附問題，可用于生物惰性系統。

BIOshell™ ?120 Oligo C18色譜柱特點

· 120 ?孔徑：能分離長達60個堿基的寡核苷酸

· 高pH值和高溫條件下出色的穩定性：專為分離寡核苷酸而設計

· 兼容性：與UHPLC和質譜兼容的鍵合相

· 硬件經表面惰性處理：降低樣品吸附

· 鍵合相：表面修飾的二甲基十八烷基硅烷
顆粒大小: 2.7 μm

· 孔徑: 120?

· USP分類: L1

· 碳載量: 5.6%

· 表面積: 75m2/g

· 是否封端: 是

· 柱溫（低pH）: 2/90 °C，柱溫（高pH）: 9/85 °C

對比實驗

與全多孔色譜柱相比，BIOshell™ A120 Oligo C18柱在分離寡核苷酸方面表現出更優異的性能。如下圖，在高pH條件下，BIOshell™ A120 Oligo C18和其他供應商的寡核苷酸色譜柱分離不同長度的寡核苷酸混合物。在對比色譜柱上，由于全多孔色譜柱色譜柱擴散路徑增加，全多孔色譜柱峰形較差，20個堿基及以上的低聚物出現拖尾。由于BIOshell™ Fused-Core®顆粒色譜柱的快速和高柱效，相同樣品在BIOshell™色譜柱上無拖尾。

出峰順序：1.10 mer ，2. 15 mer， 3, 20 mer， 4. 25 mer ，5. 30 mer， 6. 40 mer ，7. 50 mer， 8. 60 mer

色譜條件：

色譜柱： BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)

對比柱：Oligo 130A C18,1.7um,2.1*50mm

流動相A：100mM TEAA, pH 8.5

流動相B：乙腈

梯度時間：

流速：0.5 mL/min

背壓：BIOshell™140 bar, 對比柱255bar

柱溫：60 °C

進樣體積：1.0 μL

樣品溶劑：10mM Tris HCl/1mM EDTA

檢測波長：UV/PDA, 254 nm

流通池：1 μL

采集頻率100 Hz

響應時間0.025 s

長寡核苷酸的分離：

寡核苷酸的分離：從20mer - 到100mer

使用BIOshell™A120 Oligo C18 INERTProve™色譜柱可以實現單鏈DNA（ssDNA）寡聚體的分離。如示例所示，這些色譜柱成功分離100-mer的寡核苷酸，展示了其精度和效率，以及處理復雜且長序列的能力。

分離寡核苷酸混合物

在高pH條件下使用BIOshell™ A120 Oligo C18色譜柱，可以在5分鐘內分離出含有6種不同寡核苷酸的樣品。

出峰順序：1.20 mer， 2. 15 mer ，3.12 mer ，4. 25 mer， 5. 33 mer， 6. 12 mer

色譜條件：

色譜柱：BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.（70003-U）

流動相A：100mM TEAA, pH 8.5

流動相B：乙腈

梯度時間：

流速：0.4 mL/min

背壓：142 bar

柱溫：50 °C

進樣體積：1 μL of Oligonucleotide Performance Standard Mix, 12-33 NT

樣品溶劑：10mM Tris HCl/1mM EDTA

檢測波長：PDA, 254 nm

流通池：1 μL

采集頻率：100 Hz

相應時間：0.05 sec.

分離不同大小寡核苷酸

以下是分離寡核苷酸標準混合物(含有10-60個ssDNA)的應用。使用了乙酸三乙胺(TEAA)和乙腈梯度洗脫。在3.5分鐘內，使用BIOshell™ A120 Oligo C18, 2.7μm, 5 cm x 2.1 mm I.D.( 70003-U)，可分離長達60個堿基的寡核苷酸，并獲得優異的峰型和分離。

出峰順序：1.10 mer ，2. 15 mer， 3, 20 mer， 4. 25 mer ，5. 30 mer ，6 .40 mer ，7 .50 mer ，8. 60 mer

優異的批間重現性

使用4個不同批次的色譜柱，對含10-60個不同長度堿基的單鏈DNA樣品進行分析。

出峰順序：1. 10 mer， 2. 15 mer ，3. 20 mer ，4. 25 mer ，5. 30 mer ，6. 40 mer ，7. 50 mer ，8. 60 mer

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