百歐博偉生物：供試品無菌檢查是驗證樣品是否存在活菌污染的關鍵檢測項目，需嚴格控制試驗環境、操作流程、培養基質量、供試品處理等環節，才能保證結果的準確性和可靠性。以下按試驗全流程梳理核心注意事項：

一、試驗前準備階段注意事項

1、環境與設施要求

試驗需在無菌檢查實驗室內進行，分區明確（準備區、無菌操作區、培養區），無菌操作區需達到A 級潔凈度（如超凈工作臺、生物安全柜），定期進行環境監測（沉降菌、浮游菌、表面微生物）。

試驗前需對無菌操作區進行充分消毒：超凈工作臺開啟紫外燈照射 30 min 以上，臺面用 75% 乙醇擦拭；生物安全柜需提前開啟風機運行 30 min，并用消毒劑擦拭內壁。

實驗人員需穿戴無菌防護服、口罩、手套、鞋套，避免人員帶入污染。

2、試劑與耗材質量控制

培養基：需選用符合藥典標準的培養基（硫乙醇酸鹽流體培養基用于需氧菌、厭氧菌；胰酪大豆胨液體培養基用于需氧菌、真菌），使用前需做培養基適用性檢查，驗證其促生長能力和抑制能力；培養基需在有效期內使用，滅菌后需觀察外觀（無渾濁、無沉淀、無破損）。

耗材：濾膜（薄膜過濾法用，孔徑 0.45 μm，直徑一般 50 mm）、培養管、吸管、注射器等需經高壓蒸汽滅菌或射線滅菌，確保無菌；一次性耗材需檢查包裝完整性和有效期。

稀釋液與沖洗液：常用 0.9% 無菌氯化鈉溶液、pH 7.0 無菌氯化鈉 - 蛋白胨緩沖液，需經 0.22 μm 濾膜除菌，配制后需做無菌檢查；避免使用含抑菌成分的溶液。

3、供試品預處理注意事項

供試品需按規定批次抽樣，抽樣量需滿足試驗要求（一般不少于檢驗量的 2 倍，用于復試）。

固體供試品需研磨均勻，液體供試品需充分搖勻；若供試品不溶于水，需選用合適的無菌溶劑溶解，溶劑需提前驗證無抑菌性。

含抑菌成分的供試品，需提前確定中和方法，并通過陽性對照驗證中和效果。

二、試驗操作階段注意事項

1、無菌操作規范

所有操作需在無菌操作區進行，動作輕柔，避免劇烈晃動產生氣溶膠；開啟容器時，瓶口需傾斜向下，并用火焰灼燒滅菌（或用 75% 乙醇擦拭）。

移液、接種、濾膜轉移等操作需避免手部或器具接觸無菌區域；更換手套時需再次消毒手部。

同時進行多批次樣品檢測時，需做好標記區分，避免交叉污染。

2、薄膜過濾法專用注意事項

濾膜使用前需用無菌生理鹽水潤濕，避免濾膜吸附供試品中的抑菌成分。

供試品過濾時，流速需適中（避免過快導致濾膜破損）；若供試品黏度大，可適當稀釋后過濾。

沖洗濾膜時，沖洗液需沿濾杯內壁緩緩注入，充分沖洗濾膜表面，每片濾膜沖洗總量需符合藥典要求（一般不少于 100 mL）；沖洗后盡量抽干濾膜上的殘留液體，再轉移至培養基。

濾膜轉移時，需用無菌鑷子夾取濾膜邊緣，正面朝上貼入培養基管內，避免濾膜折疊或破損。

3、直接接種法專用注意事項

供試品接種體積需嚴格控制，一般不超過培養基體積的 10%（避免稀釋培養基營養成分或改變 pH，影響微生物生長）。

接種后輕輕搖勻培養基，使供試品均勻分布；避免劇烈搖晃導致培養基產生氣泡，影響后續觀察。

若供試品為油劑，需先加入適量無菌聚山梨酯 80 乳化后再接種，防止油滴包裹微生物影響生長。

4、陰陽性對照設置注意事項

陰陽性對照需與供試品同批次、同條件同步操作，不得單獨進行。

陰性對照需使用與供試品處理等量的稀釋液/沖洗液，確保操作過程無污染；陽性對照菌株需選用藥典指定菌株，菌懸液濃度需控制在10～100 CFU /管，避免濃度過高或過低影響結果判斷。

含抑菌供試品的陽性對照，需增設“供試品 + 陽性菌”組，驗證中和/沖洗措施是否有效。

三、培養與結果觀察階段注意事項

1、培養條件控制

培養基接種后需立即放入培養箱，按規定條件培養：硫乙醇酸鹽流體培養基30～35℃培養 14 天；胰酪大豆胨液體培養基20～25℃培養 14 天。

培養箱溫度需定期校準，確保溫度波動在 ±1℃范圍內；培養期間避免頻繁開啟培養箱，防止溫度波動和污染。

培養管需直立放置，避免培養基溢出；不同批次、不同類型的樣品需做好標記，分開培養。

2、結果觀察與記錄

培養期間，需每天觀察培養基的渾濁度、菌落生長情況（真菌會形成菌絲或菌落浮于液面）。

觀察時需在無菌操作區進行，避免開啟培養管時引入污染；若發現培養基渾濁，需及時涂片鏡檢，確認是否為微生物生長。

若供試品管澄清，陰性對照無菌生長，陽性對照菌生長良好，則判定供試品無菌檢查合格；若供試品管渾濁，需進行復試，復試結果仍陽性則判定不合格。

所有觀察結果需詳細記錄，包括培養時間、培養基狀態、鏡檢結果等，確保試驗可追溯。

四、其他通用注意事項

1、抑菌性供試品的特殊處理

若供試品抑菌性較強，常規沖洗無法消除時，可添加中和劑，中和劑需驗證無毒性且不影響微生物生長。

必要時可采用薄膜過濾法聯合稀釋法，降低供試品抑菌成分濃度。

2、試驗廢棄物處理

試驗結束后，所有接觸過供試品或陽性菌的耗材（濾膜、培養管、吸管等）需經高壓蒸汽滅菌后再處理，避免活菌污染環境。

3、人員資質與培訓

實驗人員需經無菌檢查專項培訓，熟悉藥典要求和操作流程，考核合格后方可上崗；定期進行技能復訓，確保操作規范性。

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