NanoDrop Ultra這類高精度設(shè)備，未做空白校正，或校正不當(dāng)，會(huì)導(dǎo)致所有測(cè)量數(shù)據(jù)失去參考價(jià)值。

空白校正是為了建立一個(gè)“零”基準(zhǔn)點(diǎn)，扣除溶劑和儀器本身的背景信號(hào)。如果跳過(guò)這個(gè)步驟，或使用了錯(cuò)誤的空白液，結(jié)果就會(huì)出現(xiàn)系統(tǒng)性偏差。

一、未正確進(jìn)行空白校正的后果

未做或未正確進(jìn)行空白校正，主要會(huì)帶來(lái)以下幾類問(wèn)題：

1、測(cè)量結(jié)果失去基準(zhǔn)：儀器無(wú)法扣除背景，顯示的“濃度”其實(shí)是樣品信號(hào)+背景信號(hào)的總和。這意味著你得到的數(shù)值是虛高的，不能反映樣品的真實(shí)情況。

2、純度比值（如A260/A280）不準(zhǔn)確：這些比值是判斷核酸、蛋白質(zhì)純度的重要指標(biāo)。如果背景扣除不當(dāng)，比值會(huì)失真，可能誤判樣品純度。

3、基線噪音大或不穩(wěn)定：這是系統(tǒng)提示你需要檢查空白校正的典型表現(xiàn)之一。

二、如何正確進(jìn)行空白校正

正確的空白校正是確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確的第一步，操作很簡(jiǎn)單：

1、選擇正確的方法：在儀器觸摸屏上，根據(jù)你的樣品類型（如dsDNA、RNA、Protein A280等）選擇對(duì)應(yīng)的檢測(cè)方法。

2、使用正確的空白液：這是最關(guān)鍵的一步。 必須使用與溶解樣品一致的緩沖液（例如，樣品用TE Buffer溶解，空白也必須是TE Buffer）。

3、執(zhí)行空白檢測(cè)：

（1）在清潔的下基座上滴加 1-2 μL 空白液。

（2）輕輕放下檢測(cè)臂，使液體形成完整液柱。

（3）點(diǎn)擊屏幕上的 “Blank” 按鈕。儀器會(huì)自動(dòng)完成校正。

（4）提示：你也可以在設(shè)置中開(kāi)啟“自動(dòng)空白檢測(cè) (Auto-Blank)”功能。開(kāi)啟后，放下檢測(cè)臂儀器便會(huì)自動(dòng)執(zhí)行空白校正，能有效避免遺忘。

4、清潔基座：抬起檢測(cè)臂，用無(wú)塵軟布（如Kimwipes）將上下基座的空白液擦凈。

三、日常操作最佳實(shí)踐

為了確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，建議養(yǎng)成以下習(xí)慣：

1、每次實(shí)驗(yàn)前都做：只要更換了樣品或緩沖液，就需要重新進(jìn)行空白校正。

2、更換溶劑必做：如果換了新的緩沖液，必須用新的空白液重新校正。

3、懷疑結(jié)果時(shí)重做：當(dāng)測(cè)量結(jié)果出現(xiàn)異常或你不確定時(shí)，穩(wěn)妥的做法就是重新清潔基座并進(jìn)行空白校正。

4、定期性能驗(yàn)證：建議每6個(gè)月使用性能驗(yàn)證試劑盒（如PV-1 Kit） 進(jìn)行一次儀器校準(zhǔn)驗(yàn)證，以確保長(zhǎng)期準(zhǔn)確性。

四、已經(jīng)忘記做空白校正，怎么辦？

如果你已經(jīng)完成了樣品測(cè)量，才發(fā)現(xiàn)忘記做空白校正，這批數(shù)據(jù)的絕對(duì)值（如濃度）是不可靠的，應(yīng)視為無(wú)效。

1、解決方案：重新測(cè)量所有樣品。先用正確的空白液進(jìn)行校正，再測(cè)量樣品。

2、檢查是否有歷史數(shù)據(jù)：查看軟件中是否保存有該樣品溶劑的歷史空白校正數(shù)據(jù)。如果有，可嘗試將其應(yīng)用于當(dāng)前數(shù)據(jù)，但這不是推薦做法，結(jié)果可靠性存疑。