樣品吸光度低于空白（顯示為負(fù)值），意味著儀器在扣除了空白的背景信號(hào)后，檢測(cè)到的樣品信號(hào)低。這通常指向空白液污染、基座不干凈或樣品本身濃度過(guò)低這幾個(gè)核心問(wèn)題。

可以按照下面的步驟來(lái)排查，通常能解決問(wèn)題。

一、檢查和清潔檢測(cè)基座

超過(guò)80%的此類(lèi)問(wèn)題都源于基座不干凈。殘留的樣品會(huì)污染新的空白液，導(dǎo)致空白讀數(shù)異常偏高。

1、正確清潔：使用柔軟的無(wú)塵布（如Kimwipes），蘸取少量去離子水，單向擦拭上下兩個(gè)光學(xué)基座，然后讓其自然晾干。對(duì)于頑固污漬，可以用75%酒精或0.5M稀鹽酸清潔，之后用大量去離子水擦拭干凈。

2、驗(yàn)證清潔效果：點(diǎn)樣 1-2 μL 去離子水進(jìn)行測(cè)量。如果各波長(zhǎng)（尤其是260nm和280nm）的吸光度值≤ 0.04A，說(shuō)明基座已經(jīng)足夠潔凈。如果讀數(shù)偏高，請(qǐng)重復(fù)清潔步驟。

二、檢查空白液與樣品

確保它們本身沒(méi)有問(wèn)題。

1、空白液與樣品液是否弄反：檢查一下，是否在“Blank”步驟誤將樣品當(dāng)作了空白液進(jìn)行校正。

2、空白液是否被污染：空白液本身是吸光度異常的最常見(jiàn)原因之一。務(wù)必使用新鮮、未受污染的，且與溶解樣品一致的緩沖液。

3、樣品濃度是否過(guò)低：如果樣品濃度極低（如dsDNA < 2 ng/μL），其信號(hào)可能弱于空白的背景噪音，導(dǎo)致結(jié)果為負(fù)值。

三、規(guī)范操作與性能驗(yàn)證

不正確的操作可能導(dǎo)致測(cè)量偏差。

1、檢查空白校正流程：確認(rèn)是否使用了與樣品一致的緩沖液進(jìn)行空白校正。更換任何溶液后，都需要重新進(jìn)行空白校正。

2、檢查樣品狀態(tài)：確保樣品是均一的，沒(méi)有氣泡或未溶解的顆粒。對(duì)于粘稠樣品，上樣前應(yīng)充分渦旋混勻并短暫離心。

3、檢查測(cè)量方法：確認(rèn)在軟件中選擇了正確的檢測(cè)方法（如dsDNA、Protein A280等）。

4、運(yùn)行性能驗(yàn)證：如果問(wèn)題依舊，建議使用的性能驗(yàn)證試劑盒進(jìn)行儀器校準(zhǔn)。賽默飛建議每6個(gè)月進(jìn)行一次性能驗(yàn)證。

四、如果問(wèn)題仍然存在

如果以上所有步驟都無(wú)法解決，可能涉及更深層的原因：

1、溶劑本身的吸收：部分緩沖液（如RIPA裂解液）在紫外區(qū)本身就有較強(qiáng)的吸收，即使正確扣除了空白，也可能導(dǎo)致低濃度樣品的信號(hào)為負(fù)值。

2、硬件或光路問(wèn)題：可能是光源老化或內(nèi)部光路出現(xiàn)偏差。此時(shí)不應(yīng)自行拆解，應(yīng)聯(lián)系專(zhuān)業(yè)工程師進(jìn)行診斷和維修。

五、總結(jié)

處理這類(lèi)問(wèn)題的核心排查思路是：從有可能的“基座清潔”和“空白液污染”開(kāi)始，這是絕大多數(shù)問(wèn)題的根源。如果對(duì)排查過(guò)程沒(méi)有把握，最穩(wěn)妥的做法是清潔基座，更換新鮮配制的空白液和樣品液，然后嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)流程重新進(jìn)行空白校正和測(cè)量。