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TLX DNA-seq Kit的核心邏輯：全流程優(yōu)化的建庫解決方案
DNA測序建庫的核心目標(biāo)，是在最小化樣本損耗的前提下，獲得覆蓋均勻、無序列偏差、適配不同測序平臺的文庫分子，而TLX DNA-seq Kit正是圍繞這一目標(biāo)，對建庫全鏈路的每個環(huán)節(jié)做了針對性設(shè)計，其作用覆蓋從原始樣本到測序-ready文庫的全流程，原理則體現(xiàn)在對不同樣本類型、不同建庫需求的精準(zhǔn)適配上。
TLX DNA-seq Kit第一個核心作用是完成原始樣本到建庫模板的高效轉(zhuǎn)化，對應(yīng)的原理是適配性的核酸捕獲體系。針對不同來源、不同質(zhì)量的核酸樣本，該Kit設(shè)計了差異化的純化方案：針對低豐度的循環(huán)腫瘤DNA、宏基因組環(huán)境樣本等微量核酸，通過優(yōu)化的磁珠結(jié)合體系和低損耗的轉(zhuǎn)移流程，大程度減少樣本在純化環(huán)節(jié)的損失，避免低豐度靶標(biāo)被遺漏；針對FFPE病理樣本、古DNA等降解類樣本，采用了溫和的純化條件，優(yōu)先保留短片段核酸，避免長片段核酸的非特異性吸附，保證降解樣本也能獲得足夠長度的建庫模板，從源頭解決了不同樣本類型的建庫適配難題。
第二個核心作用是將核酸精準(zhǔn)轉(zhuǎn)化為帶測序接頭的文庫分子，對應(yīng)的原理是低偏好的酶促反應(yīng)體系。建庫過程中的末端修復(fù)、A尾添加、接頭連接三個核心反應(yīng)環(huán)節(jié)，傳統(tǒng)方法往往容易出現(xiàn)堿基偏好、接頭二聚體過多的問題，該Kit采用了高保真的末端修復(fù)酶和連接酶，保證核酸末端的精準(zhǔn)修飾，避免堿基偏好；同時接頭采用了獨特的結(jié)構(gòu)設(shè)計，大幅降低了同源接頭的自連概率，針對微量樣本優(yōu)化了連接反應(yīng)的緩沖體系，提升了接頭連接效率，減少了后續(xù)PCR擴(kuò)增的循環(huán)數(shù)，從反應(yīng)源頭降低了擴(kuò)增帶來的序列偏差。
第三個核心作用是輸出可直接上機(jī)的合格文庫，對應(yīng)的原理是多梯度純化篩選體系。TLX DNA-seq Kit采用了兩步梯度純化的磁珠體系，可以根據(jù)目標(biāo)文庫的片段大小精準(zhǔn)篩選，有效去除反應(yīng)殘余、未連接的接頭、過短的降解片段等雜質(zhì)，在減少有效文庫損失的同時保證文庫的純度，且純化后的文庫無需復(fù)雜的質(zhì)控調(diào)整，就能直接適配Illumina、華大智造等主流測序平臺的上機(jī)要求，大幅簡化了建庫后的處理流程。整體來看，該Kit的作用是整合了傳統(tǒng)建庫的多步操作，通過全流程的試劑和條件優(yōu)化，解決了不同樣本建庫的痛點，最終實現(xiàn)穩(wěn)定、高效、低偏差的建庫效果。
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