5' 端轉(zhuǎn)錄組利器｜Enzymax #88 RppH RNA 5' 焦磷酸水解酶

背景簡介：

原核生物新生轉(zhuǎn)錄本、體外轉(zhuǎn)錄 RNA 天然攜帶5' 三磷酸基團（ppp-RNA），而 RNA 連接酶、5'RACE、5' 端高通量測序僅識別5' 單磷酸 RNA（p-RNA），三磷酸結(jié)構(gòu)會直接阻斷接頭連接，大幅降低文庫有效 reads、擴增無條帶。

傳統(tǒng)實驗存在多重難題：

1.經(jīng)典TAP 煙草焦磷酸酶供貨不穩(wěn)定，僅能處理真核帶帽 mRNA，無法單獨處理原核三磷酸轉(zhuǎn)錄本；

2.市面同類 RppH 雜酶污染嚴重，微量 RNA 極易降解，低豐度新生轉(zhuǎn)錄本回收率極低；

3.脫帽酶僅能去除真核 m?G 帽，無法處理無帽的 5' 三磷酸原核 RNA，兩套酶體系分開操作流程繁瑣；

4.酶儲存穩(wěn)定性差，反復凍融后活性斷崖式下跌，大批量轉(zhuǎn)錄組實驗重復性差。

針對原核轉(zhuǎn)錄圖譜、nascent RNA 新生轉(zhuǎn)錄組、5'RACE、小 RNA 建庫需求，美國Enzymax 推出#88 RppH 重組大腸桿菌 RNA 5' 焦磷酸水解酶，專一水解 RNA 5' 端焦磷酸，將 ppp-RNA 轉(zhuǎn)化為可連接接頭的 p-RNA，可與 #94 Tobacco Decapping Plus 2 脫帽酶聯(lián)用，一次性同步處理真核加帽 mRNA + 原核三磷酸轉(zhuǎn)錄本，實現(xiàn)全轉(zhuǎn)錄本 5' 端同步分析。

產(chǎn)品優(yōu)勢：

1.專一水解 5' 三磷酸 RNA，可替代 TAP

特異性切除 ppp-RNA 末端焦磷酸基團，高效生成 5' 單磷酸 RNA，適配原核新生轉(zhuǎn)錄本、體外轉(zhuǎn)錄 RNA 處理，可直接替代停產(chǎn) TAP 用于小 RNA 建庫實驗，數(shù)據(jù)可橫向比對。

2.超高蛋白純度，零雜酶干擾

重組蛋白嚴格純化，無核酸酶、蛋白酶殘留，微量低豐度 RNA 樣本不會發(fā)生降解，保障 5' 端測序、RACE 實驗低背景。

3.儲存穩(wěn)定性優(yōu)異，長期實驗重復性強

專用甘油穩(wěn)定緩沖液，-80℃存放 12 個月酶活無明顯衰減，分裝后多次取用性能穩(wěn)定，適合大批量轉(zhuǎn)錄組樣本批量處理。

4.可與脫帽酶聯(lián)用，一站式全轉(zhuǎn)錄本處理

搭配 #94 Tobacco Decapping Plus 2 全能去帽酶，同步完成真核加帽 mRNA 脫帽、原核三磷酸 RNA 去焦磷酸，統(tǒng)一轉(zhuǎn)化為 5' 單磷酸 RNA，一套流程搞定真核 + 原核樣本。

5.適配下游全套純化耗材，無縫銜接實驗

酶促反應結(jié)束后，可直接使用 EZCR304 RNA 純化濃縮試劑盒、EZC107 微量 Tini 柱回收 RNA，去除酶、鹽離子雜質(zhì)，高效保留微量轉(zhuǎn)錄本。

產(chǎn)品應用：

1.原核新生轉(zhuǎn)錄本 dRNA-seq、5' 端轉(zhuǎn)錄起始位點圖譜分析（核心應用）處理細菌原生無帽 5' 三磷酸 mRNA/sRNA，轉(zhuǎn)化為單磷酸 RNA 后連接測序接頭，富集真實轉(zhuǎn)錄起始片段，精準定位啟動子區(qū)域。

2. 5' RACE 全長基因克隆（搭配 #94 脫帽酶黃金組合）真核 mRNA 經(jīng) #94 脫帽、原核轉(zhuǎn)錄本經(jīng) #88 RppH 去焦磷酸，全部生成 5' 單磷酸 RNA，大幅提升接頭連接效率，穩(wěn)定擴增全長未知 5' 端序列。

3.小RNA 高通量測序文庫構(gòu)建替代傳統(tǒng) TAP 酶處理三磷酸化小 RNA，提高小 RNA 克隆效率，用于線蟲、細菌小 RNA 轉(zhuǎn)錄組研究。

4. RNA 降解、mRNA 穩(wěn)態(tài)分子機制體外重構(gòu)模擬細菌體內(nèi) RppH 介導的 5' 端依賴 RNA 降解通路，解析 RNA 結(jié)合蛋白、核酸酶調(diào)控 RNA 穩(wěn)定性機制。

5.體外轉(zhuǎn)錄、mRNA 疫苗原料質(zhì)控體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物去除 5' 三磷酸基團，用于人工帽類似物、非經(jīng)典 NAD?修飾 RNA 的酶活驗證與功能檢測。

產(chǎn)品信息：

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