賽默飛Qubit4熒光分光光度計樣本濃度超出范圍怎么辦
Qubit 4 熒光計顯示“樣本濃度超出范圍”,通常是指樣本濃度過高或過低,超出了當前所用試劑盒的檢測范圍。
一、先確認是“過高”還是“過低”
儀器屏幕會給出提示,你需要先看清楚是“濃度過高 (Too High)”還是“濃度過低 (Too Low)”。
1、濃度過高 (Too High):樣本濃度超出了試劑盒檢測上限。
2、濃度過低 (Too Low):樣本濃度低于試劑盒檢測下限。
二、解決方法
1、如果濃度過高 (Too High)
稀釋樣本:這是常用的方法。用試劑盒中提供的緩沖液 (Buffer) 稀釋樣本。注意不要用水稀釋。稀釋后,在軟件中輸入稀釋倍數(shù),儀器會自動計算原始濃度。
(1)減少樣本體積:在保持總體積不變(如200 µL)的情況下,適當減少樣本加入量。例如,將樣本體積從2 µL減至1 µL。
(2)更換試劑盒:如果樣本濃度遠高于當前試劑盒上限(如dsDNA HS上限100 ng/µL),可換用檢測范圍更寬的BR試劑盒(如dsDNA BR上限2000 ng/µL)。
2、如果濃度過低 (Too Low)
(1)增加樣本體積:在保持總體積不變(如200 µL)的情況下,適當增加樣本加入量。Qubit 4的最大上樣體積為20 µL。
(2)更換試劑盒:如果樣本濃度低于當前試劑盒檢測下限(如dsDNA BR下限2 ng/µL),可換用靈敏度更高的HS試劑盒(如dsDNA HS下限0.2 ng/µL)。
三、預防建議
為了避免反復出現(xiàn)該問題:
1、了解檢測范圍:不同Qubit試劑盒的線性范圍不同。以下是常用試劑盒的參數(shù),供你參考:
(1)dsDNA HS Assay:0.2 - 100 ng
(2)dsDNA BR Assay:2 - 2000 ng
(3)RNA HS Assay:0.5 - 100 ng
(3)RNA BR Assay:5 - 1000 ng
2、做好預實驗:若不確定樣本濃度,可用NanoDrop等儀器進行預判,或先用少量樣本測試,再確定合適的稀釋倍數(shù)。
3、規(guī)范操作:確保所有試劑和樣本在室溫下平衡,反應液充分渦旋混勻并短暫離心去除氣泡。
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