通用型組織解離液-單細(xì)胞樣本制備標(biāo)準(zhǔn)protocol

一、實驗前準(zhǔn)備-全套試劑耗材

組織樣本處理全套試劑耗材實拍圖：

配套產(chǎn)品清單：

• PBS緩沖液 abs961、abs962

• 70μm篩網(wǎng) abs7232

• RPMI1640培養(yǎng)基 abs9484

• 紅細(xì)胞裂解液 abs9101

• 細(xì)胞分離液 abs9102

• 組織解離液 abs9482（核心產(chǎn)品）

二、樣本取材及預(yù)處理

操作說明：小鼠斷頸處死后，根據(jù)實驗需求進(jìn)行取材，可分離取材部位包含：結(jié)腸、脾臟、腸道組織、肺組織等各類小鼠臟器。

三、標(biāo)準(zhǔn)化組織解離步驟參考

1、組織消化解離

1. 酶消化：將組織塊（約100-200mg）轉(zhuǎn)移至離心管，加入 1 mL 組織解離液abs9482（難消化組織可延長孵育時間）。

2. 搖床孵育：將離心管置于 37℃恒溫水平搖床，以 80-100 rpm 的轉(zhuǎn)速孵育 30-40分鐘。【也可使用全自動組織處理器替代手動搖床】

3. 過濾過篩：70μm 細(xì)胞篩網(wǎng)（abs7232）過濾，預(yù)冷 1×PBS 3-5mL 沖洗篩網(wǎng)；
   注：過濾篩網(wǎng)時若殘留明顯組織塊，可用5 mL注射器活塞研磨組織，直至無肉眼可見組織碎片。

4. 細(xì)胞懸液 4℃，400 g 離心5 min，棄去上清；

5. 細(xì)胞沉淀使用預(yù)冷1x PBS（abs962）重懸，4℃，400 g 離心5 min，棄去上清；

6. 可選步驟：根據(jù)實驗需求，使用紅細(xì)胞裂解液（abs9101）去除樣本內(nèi)紅細(xì)胞干擾；

7. 適量預(yù)冷1x PBS重懸細(xì)胞沉淀，得到純凈單細(xì)胞懸液，可直接用于后續(xù)流式、細(xì)胞分選等實驗。

2、細(xì)胞計數(shù)，活率測定

使用本解離液解離小鼠不同組織制備單細(xì)胞懸液后，可通過流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞活率，不同臟器樣本均能獲得高活率單細(xì)胞。

5、流式結(jié)果展示

小鼠脾臟組織單細(xì)胞懸液流式染色結(jié)果

小鼠肺臟組織單細(xì)胞懸液流式染色結(jié)果

小鼠肝臟組織單細(xì)胞懸液流式染色結(jié)果

小鼠小腸組織單細(xì)胞懸液流式染色結(jié)果

小鼠腎臟組織單細(xì)胞懸液流式染色結(jié)果

小鼠心臟組織單細(xì)胞懸液流式染色結(jié)果

四、通用型組織解離液-abs9482 已發(fā)表文獻(xiàn)匯總

配套完整試劑耗材產(chǎn)品清單