Rosetta（gamiB） 感受態細胞說明書

（Rev.A）

保 存：-80℃保存，運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年，-80℃保存至少 6 個月。

產品簡介：

本公司生產的Rosetta（gamiB）感受態細胞是采用大腸桿菌Rosetta（gamiB）菌株經特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19 質粒檢測，轉化效率zui高可達 2×10⁷cfu/μg，-80℃保存 3-5 個月轉化效率不發生改變。

基因型:  F-ompT hsdSB(rB- mB-) gal dcm lacY1 (DE3) pRARE (argU, argW, ileX, glyT, leuW, proL) (CmR)

特 點: 一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其 φ80 lacZ△M15 基因的產物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現 β 互補，可用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1. 將感受態細胞置于冰上融化，以下實驗以 100μl 感受態細胞為例。
2. 向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置 30 分鐘。
3. 將離心管置于 42℃水浴中熱擊60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動離心管。
4. 向離心管中加入 900μl 無菌無抗的 SOC 或 LB 培養基，37℃ 180 rpm 振蕩培養 30分鐘到1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
5. 取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養 12-16小時或6-8小時培養。涂布用量可根據具體實驗來調整，如轉化的 DNA 總量較多，可取200μl 左右的轉化產物涂板；反之，如轉化的 DNA 總量較少，可4℃，2500g離心5min后，棄去上清約700μl，用剩余約200-300μl 的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。

注意事項：

1. 感受態細胞應保存在-80℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。
2. 實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。
3. 轉化時，轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時 DNA 體積要小于感受態細胞體積的十分之一。
4. 轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板 DNA 總量。
5. 為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到zui低。

Rosetta（gamiB） 感受態細胞  Rosetta（gamiB） 感受態細胞           

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