RNA甲基化修飾試劑盒

此品非常適合從細胞與組織等樣本中提取的總RNA，進行RNA甲基化修飾操作，整個實驗時間僅需3小時。

重點提示

使用必讀： 使用：采用RNA甲基化修飾試劑盒處理得到的轉(zhuǎn)化RNA對于像甲基化特異性PCR， MS-HRM，和亞硫酸鹽測序如：焦磷酸測序和深度測序是非常理想的。其中總RNA可以是 來自哺乳動物，植物，真菌，細菌和病毒等樣本中得到的。  

RNA輸入量：對于每次亞硫酸鹽實驗RNA的輸入量是5 ng-1 ug.zui為理想的RNA的輸入 量應該是200 – 500 ng。當使用做甲基化特異性RT-PCR時，RNA的 輸入量可以少至<10 ng，但是PCR循環(huán)數(shù)應該多于45。RNA處理后的得率取決于RNA的輸 入量，自然的RNA量和起始材料來源。

起始材料：非常適合使用各種細胞和組織樣本，比如：來自培養(yǎng)瓶和微孔板培養(yǎng)的細胞， 新鮮和冷凍的組織，石蠟包埋組織，血液，體液樣本等等。

預防措施:       為了避免交叉污染，接下來的預防措施是非常有必要的。F-Spin Columns：仔細地吸 取樣本或溶液到 F-Spin Columns。使用滅菌的槍頭并在轉(zhuǎn)移完不同的溶液時隨時更換。在 將 F-Spin Columns 放到微型離心機前始終保證蓋子是蓋緊的。在整個操作步驟中必須帶干 凈的手套。為了避免手套接觸到樣本，應該理科更換手套。

產(chǎn)品簡介

報道，5-甲基胞嘧啶（5-mC）不僅廣泛的存在于基因組 DNA 中，在 RNA 中也普 遍存在。但是，RNA 甲基化的功能仍不清楚。有些研究認為 RNA 甲基化在翻譯調(diào)控中起著 重要作用，而有些研究認為其在 RNA 的穩(wěn)定性及結(jié)構(gòu)中起著重要作用。在人類中, 5-mC 會 出現(xiàn)在各種不同形式的 RNA 分子上，包括 tRNAs,rRNAs,mNRAs,非編碼 RNA(ncRNAs)等。 至少有 10275 個的 5-mC 候選位點被發(fā)現(xiàn)在 mRNAs 和 ncRNAs,它覆蓋了 10.6%殘留在轉(zhuǎn) 錄組的總胞嘧啶。5-mC 似乎濃縮在某些類型的 ncRNA,但相對缺乏 mRNAs。然而,絕大多 數(shù)(83%)的候選位點中發(fā)現(xiàn)在mRNAs。在這些轉(zhuǎn)錄組上, 5-mC 似乎耗盡在蛋白質(zhì)編碼序列， 且濃縮在 5’和 3’UTRs。兩個不同的甲基轉(zhuǎn)移酶,NSUN2 和 DNMT2 已知催化 5-mC 修改在 真核生物的 RNA。zui近強有力的數(shù)據(jù)表明,RNA 胞嘧啶甲基化作用影響著調(diào)節(jié)各種生物過 程，如 RNA 穩(wěn)定性與信使核糖核酸（mRNA）的翻譯。此外,損失 5-mC 在 vault RNAs 導 致異常的處理成 Argonaute-associated 小 RNA 片段,可以作為小分子核糖核酸(即 microRNA) 。 因 此 , 受 損 的 處 理 的 vault ncRNA 可 能 與 導 致 人 類 疾 病 的 病 因 NSUN2-deficiency 人類疾病相關(guān)。亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化 RNA,緊接著是 RT-PCR 擴增、克隆和 可信的測序分析，來收集可靠的關(guān)于 RNA 胞嘧啶甲基化狀態(tài)的信息，變得尤為重要。由于 RNA 的不穩(wěn)定性，導致對于 RNA 的研究十分困難。為此，我公司給您強烈* RNA 甲基 化修飾試劑盒，解決了如上的問題。該產(chǎn)品包括了進行修飾所有必要組件，*設(shè)計的混合 液配方包含了 RNA 的保護劑，以防降解。這樣有效保證了胞嘧啶轉(zhuǎn)化成尿嘧啶，而甲基化 的胞嘧啶幾乎不受影響。

無毒的 RNA 緊緊的結(jié)合在離心柱基質(zhì)上， RNA 可以有效去除殘余的亞硫酸氫和鹽， 得到純凈的修飾 RNA。洗脫后的 RNA 可以用于做 qMSP（即 RT-PCR），克隆，MS-HRM 和測序分析（如：焦磷酸分析和深度測序）等各種 RNA 甲基化后續(xù)實驗分析。產(chǎn)品功能簡 介如下：

有效且高效地準備轉(zhuǎn)化好的RNA用于各種下游實驗分析。

。這個

工具是專門為亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化和驗證RNA而設(shè)計的，具有如下的優(yōu)勢和特性：

l 快速簡便的操作流程僅需 3 小時   l 將未甲基化的 RNA 胞嘧啶（C）*轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（U），轉(zhuǎn)化率>99.9% ；不當或錯誤的轉(zhuǎn)化 率<0.1% (甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶)。  l 強給力的 RNA 保護劑有效防止了 RNA 的降解，保護了>90%的 RNA。  l 包括的對照引物是專門針對特異轉(zhuǎn)化后的 RNA 設(shè)計的，可以用來測試其是否*正確的實現(xiàn)了 亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化。  l 可用于亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化的 RNA 低至每次反應 5 ng  l 簡單、可信和實驗條件始終如一。  

原理/步驟

 包括了所有定性修飾總RNA樣本的必要試劑。*轉(zhuǎn)化試劑包含了 RNA保護劑，有效防止了化學試劑和嗜熱試劑的降解。這樣提高了胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶的 效率，胞嘧啶脫氨基作用可以可以忽略不計。無毒的RNA捕獲溶液增強了RNA結(jié)合在柱基 質(zhì)上的能力，這樣轉(zhuǎn)化后的RNA可以有效地被洗脫同時將亞硫酸氫鹽和鹽分*清除。更 值得一提的是，在這個試劑盒中我們配套的提供了一對特異性的甲基化引物，*地方便了 您進行qMSP（甲基化定量PCR）分析。