總體RNA甲基化極易定量檢測試劑盒（熒光法）

此品非常適合從各種細胞、組織、哺乳動物、真菌、細菌、植物、血漿和血清等樣本中提取的總RNA，進 行總體水平的RNA甲基化定量分析，整個實驗時間僅需2.4小時。主要檢測儀器：熒光分光光度計。

 重點提示

使用必讀：

使用：總體RNA甲基化極易定量檢測試劑盒（熒光法）） 專門為定量檢測總RNA中 RNA 甲基化水平而設計的。其中總RNA可以是來自哺乳動物，植物，真菌，細菌和病毒等樣本 中得到的，但不*于此，培養細胞、新鮮和冷凍的組織、血漿/血清樣本和體液等樣本。  

RNA輸入量：對于每次實驗RNA的輸入量是50-300 ng.zui為理想的RNA的輸入量應該 是200 ng，正如我們所知，在某些種屬中RNA中的5-mC通常不到總RNA的0.1%。

起始材料：非常適合使用各種細胞和組織樣本，比如：來自培養瓶和微孔板培養的細胞， 新鮮和冷凍的組織，石蠟包埋組織，血漿/血清樣本，體液樣本等等。

內控：這個試劑盒中包括了陽性RNA對照和陰性RNA對照。使用0.05%到2% 的RNA 對照繪制標準曲線。因為不同的組織之間RNA中5-mC的含量不一樣；正常的和病變的部分 也不一樣；或處理和不處理的條件。因此，我們建議使用二份樣本來做，這樣可以保證生成 信號的可信性。這個試劑盒容許實驗人員對于RNA進行定量并且是取二份不同提取的 RNA樣本對于RNA進行相對定量分析。

預防措施:       為了避免交叉污染，小心的吸取樣本或將溶液添加到微孔板中。使用帶濾芯的吸頭， 并且在不同溶液的轉移中，要及時的更換槍頭。在整個實驗操作過程中，建議帶上手套。如 果手套與樣本有接觸，應該立即更換新的手套。

產品簡介

在 DNA 中 5-甲基胞嘧啶通過 DNA 甲基轉移酶甲基組的同價原理發生在胞嘧啶環的第五位碳原子上。這個過 程很好地被研究并且通常伴隨有基因的表達和抑制。尤其是在人類中觀測到，5-甲基胞嘧啶發生在各種形

式的 RNA 分子中，包括 tRNAs,rRNAs,mRNAs 和非編碼 RNAs(ncRNAs)。5-甲基胞嘧啶看起來都富集于 ncRNA

這類中，但是相對的在 mRNAs 中是在減少。 5-甲基胞嘧啶的水平在動物基因組中是不一樣的，水平量在一

些昆蟲中不被發覺的到在人類細胞中大概有 0.1-0.45%的總 RNA 量。大多數（83%）的 5-甲基胞嘧啶是在

mRNAs 中發現的。在這些轉錄中，5-甲基胞嘧啶在蛋白編碼測序中出現減少；而在 5’和 3’UTRs 中出現富

集。*，2 種不同的甲基轉移酶，NSUN2 和 DNMT2 在真核生物 RNA 中通過催化 5-甲基胞嘧啶的修飾

形式，會減少 5-mC。現在已經有很有力的證據表明：RNA 胞嘧啶的甲基化影響著各種生物進化的規則例如：

RNA 穩定性和 mRNA 翻譯。此外，在拱形 RNAs 中 5-mC 的缺失會異常的引起相關的小 RNA 片段化且這些小 RNA

發揮著正常的功能。因此，拱形 ncRNA 的損失可能有助于發現人類因缺失 NSUN2 而引起的發揮失調。

*您擴展閱讀如下內容：*，在真核生物中，m6A (N6-methyladenosine)是在 RNA 分子中zui常見

的和豐富存在的。這種修飾是由 m6A 催化甲基轉移酶復雜 METTL3 和zui近發的 m6A RNA 去甲基轉移酶如 FTO 和 ALKBH5，這種 m6A RNA 去甲基是以 α-ketoglutarate m6A(α-KG)-和 Fe2+-方式進行的。 結果表明, 在 許多生物過程中，如從生命發展和代謝生育，METTL3,FTO 和 ALKBH5 扮演著重要角色。超過 80%的 m6A 是以

RNA 甲基化的形式存在于不同的物種。 m6A 主要分布在 mRNA 和也發生在非編碼 RNA(ncRNA)如 tRNA,rRNA

和 snRNA。相對豐富的 m6A 在 mRNA 轉錄時已經表明影響核糖核酸代謝過程,如拼接,核出口,翻譯能力和穩

定性,RNA 轉錄。異常甲基化水平的 m6A 誘導缺陷甲基化酶和 m6A RNA 去甲基酶可能導致 RNA 功能障礙的和

疾病發生。例如,異常低水平在正常 m6A 目標由于增加患者 FTO 活動、FTO 基因突變,通過迄今還未通路,導

致了肥胖和相關疾病的發作。動態和可逆化學 m6A 修飾，在 RNA 中也可以作為一種新穎的表觀遺傳標記的

生物學，意義深遠可以預見。因此，更多的有用的信息，更好理解 m6A RNA 甲基化水平和分布對 RNA 轉錄、

診斷和治療疾病非常有益。

該產品中,總RNA必將結合在微孔板上，使用一種高特異性的RNA溶液方案。使用特異性較強的捕獲抗體和檢

測抗體來分析m6A。檢測產生的增強信號,然后通過讀取在微型板分光光度計波長為450 nm處吸光度進行比

色定量。m6A的數量與測量的OD值強度是成正比的。在這個試劑盒中包括陽性和陰性對照。繪制標準曲線 (范

圍:0.02到1 ng的m6A)或單點對照的m6A可以用作陽性對照。因為m6A的含量，在不同的組織,正常和病變的

部位,或在處理過以及未處理的條件下,我們建議運行2份樣品,以確保信號生成的可信心性。這套解決方案

將允許研究人員選擇定量一個數量的m6A或確定相對m6A RNA甲基化狀態的兩個不同的RNA樣品。

該款產品擁有一套完整的優化緩沖液和試劑體系，可以采用比色或熒光法來定量總RNA中的 m6A

(N6-methyladenosine)。對于總RNA(從哺乳動物，各種組織或細胞樣本如像培養瓶和培養皿培養的細胞，

新鮮和冷凍的組織，石蠟包埋組織，血液，體液，植物，真菌，細菌和病毒等任何樣本中提取的) 中m6A

直接定量檢測甲基化狀態是非常理想的。更多信息猛戳產品名稱：m6A RNA甲基化定量檢測試劑盒（比色法）

zui近，一些新穎的核苷酸修飾形式，首先在DNA中發現。比如：5-hmC，5-fC，5-caC。同時這些形式在

人類和小鼠的組織中也被檢測到。這些修飾的核苷酸一般是由5-mC氧化后得到的；通過TET家族酶反應得到。

在mRNA中m6A甲基化是可逆的（文獻1）

對于細胞與組織等樣本，（熒光法） 具有以下

精確和方便的定量檢測5-甲基胞嘧啶是極其的有用。在各種生理學上和病變中，識別和理解

發生在RNA上的5-mC甲基化水平的變化是非常有意義的。目前僅有的基于色譜的技術比

如：MS-LC對于檢測RNA中總體的5-mC水平。然而，這種方法費時，通量低，需要的RNA

量多和高成本。為了解決這些問題，我們lian合國外的表觀遺傳學公司特別的開發了：總

體RNA甲基化極易定量檢測試劑盒（熒光法）。這款試劑盒有如下的優勢和特點：

l 極速：整個操作步驟僅需 2 小時 40 分鐘完成。基于一個樣本 2 份分析測定。  l 穩定：這款試劑盒容許分析過程有更大的信號窗口，且復孔只有微小的變化。 l 方便：內在低背景噪音，可以消除孔板阻斷的步驟。 l 高敏，檢測的zui低下限為 0.02%的 5-mC RNA，RNA 輸入量是：200ng 。 l 特異性：高特異性地結合 5-mC，在未甲基化的胞嘧啶或羥甲基化胞嘧啶不會產生交叉反應；針對不 同的濃度范圍的樣本 RNA。  l 普遍性：陽性對照和陰性對照容許對任何物種的 RNA，檢測 5-mC RNA。 l 精確性：*的陽性對照是可以按照一定的百分比，分成幾部分，然后繪制標準曲線，精確性更高。 結果堪比 HPLC-MS 色譜分析。甚至更優。  l 靈活性：96 孔可拆卸板模式使研究人員能根據自己需要選擇手工或是高通量模式分析。 l 操作簡便、可信、分析條件始終如一。