植物組織培養是指通過無菌操作,把外植體接種到培養基上,在人工控制的環境條件下進行離體培養,使其生長分化成完整植株的過程。在植物組織培養技術研究和工業化生產過程中,污染、褐變、玻璃化、生根難、煉苗難等問題,造成組培生產成本偏高。下面將對污染、褐變、玻璃化等常見問題進行淺析:
一、污染:
植物組織培養過程中培養基和培養材料滋生雜菌,導致培養失敗的現象。接種材料(外植體)帶菌;培養基、接種工具、母瓶滅菌;室內潮濕,霉菌繁衍多;操作人員接種不規范等多種原因都會引起污染。
解決辦法:
嚴格外植體滅菌
防止材料帶菌
培養基、接種工具滅菌
保持培養室、接種室、超凈工作臺干凈整潔
培養物污染后應及時高壓滅菌后處理
選擇熱穩定高效抗菌劑PPM,可以有效抑制由空氣、滅菌不夠、交叉污染、外植體消毒等各種原因導致的植物組培苗的細菌、真菌和農桿菌污染清除與預防。
二、褐變:
植物組織中的多酚氧化酶被激活,產生醌類物質,呈棕褐色,當擴散到培養基后,會抑制其他酶的活性,從而影響接種外植體的培養。由于多酚氧化物活性上的差異,有些品種的外植體再接種后容易褐變。一般來說,老熟的組織在接種后褐變程度較幼嫩組織嚴重。培養基中無機鹽濃度過高也會增加褐變程度。
解決辦法:
選擇生長旺盛的外植體
合適培養條件,無機鹽成分、植物激素水平、光照強度、培養溫度等
連續轉移
使用半胱氨酸、抗壞血酸等可有效避免或減輕外植體的褐變現象
培養基中添加0.1%-0.5%的活性炭對防止褐變有較為明顯的效果
三、玻璃化:
離體培養物的嫩莖、葉片呈半透明水漬狀的現象。培養基中激素濃度過高;培養容器透氣性差、濕度過高;瓊脂濃度低;溫度過高等原因都可能引起玻璃化。
解決辦法:
增加瓊脂用量,降低培養基的水勢
采用通透性較好的容器進行培養
減少培養基中含氮化合物的用量
降低培養溫度,進行變溫培養
降低細胞分裂素用量
增加光照
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