隨著寡核苷酸藥物研發(fā)的快速推進，生物樣本中寡核苷酸的準確定量已成為藥代動力學（PK）研究的核心環(huán)節(jié)。寡核苷酸藥物的血漿樣本分析面臨低濃度、強極性、高蛋白結合率、非特異性吸附嚴重等多重挑戰(zhàn)。島津（上海）實驗器材有限公司提供完整的耗材解決方案，以血漿中21-mer PS-ASO的測定為例，系統(tǒng)闡述從前處理到色譜分離的技術要點，助力用戶實現寡核苷酸生物樣本的高效分析。

以Fomivirsen（21-mer PS-ASO）為例，對血漿樣本進行方法學考察，驗證整套耗材方案的實際性能。

1. 酶解消化：

   取200 μL血漿，加入20 μL鹽酸胍、20 μL TCEP及100 μL蛋白酶K溶液，55℃震蕩消化40 min，釋放與蛋白結合的寡核苷酸。消化完成后，1:1加入水混勻，待凈化。

2. SPE凈化：

   SHIMSEN Oligo micro-SPE板經500 μL甲醇、500 μL乙酸銨（pH 5.5）活化后上樣，依次用1 mL乙酸銨溶液、1 mL 50%乙腈乙酸銨溶液清洗，最后用洗脫液（pH 11.0）兩次洗脫，收集洗脫液待測。

• 色譜柱：Shim-pack Scepter Claris C18（1.9 μm，2.1×50 mm）

• 流動相：A：0.5% HFIP–0.1% DIEA水溶液；B：0.5% HFIP–0.1% DIEA乙腈溶液

• 流速：0.3 mL/min

• 柱溫：50℃

• 進樣量：5 μL（CO-injection，30 μL水）

• 梯度洗脫：

• 離子化模式：ESI，負離子掃描

• 掃描模式：多反應監(jiān)測（MRM）

• 碰撞氣：氬氣

• 接口溫度：400℃

• DL溫度：250 ℃

• 加熱模塊溫度：400 ℃

• MRM參數：
  

實驗結果表明，兩個濃度水平下回收率均處于75–90%的理想區(qū)間，RSD均低于4%，完全符合生物分析方法驗證的規(guī)范要求。低濃度下RSD僅0.61%，充分體現了島津耗材的優(yōu)異重現性。

高效凈化的核心利器

樣品前處理是寡核苷酸生物分析的第一道關卡，直接決定方法的回收率和穩(wěn)定性。SHIMSEN Oligo micro-SPE plate采用針對寡核苷酸分子優(yōu)化的特殊吸附機理，配合96孔板格式實現高通量處理。

• 特殊吸附機理，回收率穩(wěn)定：

  填料表面經特殊處理，可特異性捕獲帶負電的寡核苷酸分子，同時有效去除蛋白、脂質和鹽類干擾。實驗數據顯示，血漿中Fomivirsen回收率在75-90%之間，達到行業(yè)前沿水平。

• 低吸附設計，減少樣品損失：

  板體及篩板均采用低吸附材質，配合優(yōu)化的洗脫溶劑體系，最大程度降低寡核苷酸在管壁和填料上的非特異性吸附，尤其對低濃度樣本的回收率保障至關重要。

• 方法流程簡潔，易于標準化：

  裂解-活化-上樣-清洗-洗脫的經典流程，使用經典裂解液方法處理后，通過酸性體系進行上樣與清洗，堿性體系進行洗脫，無需長時間孵育，也無需復雜的離子對試劑添加，操作簡便且批次間重現性好。

色譜分離的高效保障

寡核苷酸的強極性使其在普通C18柱上難以獲得有效保留和良好峰形。Shim-pack Scepter Claris C18采用1.9 μm超細粒徑的雜化硅膠填料與優(yōu)化的鍵合技術，結合惰性化柱內涂層，在寡核苷酸的反相分離分析上展現出獨特的優(yōu)勢。

• 高柱效與優(yōu)異保留能力：

  1.9 μm粒徑填料提供超高理論塔板數，配合優(yōu)化的碳載量和鍵合密度，在HFIP-DIEA離子對體系下可實現寡核苷酸的高效保留與尖銳峰形，單針分析時間短，大幅提升分析通量。

• 低吸附管路與柱硬件設計：

  色譜柱篩板和柱內壁均經過特殊處理，顯著減少寡核苷酸的金屬吸附和管壁吸附，降低峰拖尾，提高定量準確性，無需專門鈍化。

• 寬pH，高柱溫耐受：

  色譜柱填料采用雜化硅膠技術，可在pH 1-12范圍內穩(wěn)定使用，完美適配（HFIP-DIEA，50-70℃）這一寡核苷酸分析經典體系，長期使用柱效穩(wěn)定，保證實驗連貫性。

• 優(yōu)異的批次重現性：

  嚴格的填料合成與色譜柱裝填質控，確保不同批次色譜柱間保留時間、柱效、選擇性高度一致，保證方法重現性。

寡核苷酸藥物研發(fā)進入高速發(fā)展期，對生物分析的靈敏度、準確度和通量提出了更高要求。島津推出SHIMSEN Oligo micro-SPE前處理板與Shim-pack Scepter Claris C18色譜柱強強聯合，完美契合寡核苷酸分析痛點，實現效率與可靠性的突破。對于從事寡核苷酸藥物臨床前與臨床生物分析領域的研究者，可以此作為一套快速落地、性能優(yōu)異的標準化解決方案，有效縮短方法開發(fā)周期，保障研究數據質量。