在多參數(shù)流式細(xì)胞術(shù)中，死細(xì)胞的非特異性染色是導(dǎo)致假陽性信號和數(shù)據(jù)變異的主要來源。尤其在涉及胞內(nèi)細(xì)胞因子或核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子檢測時，固定和破膜操作會使死細(xì)胞碎片和抗體非特異性結(jié)合更為嚴(yán)重，直接影響稀有細(xì)胞亞群的準(zhǔn)確鑒定。因此，在染色方案中納入一款固定后信號不失真的活力染料，已成為高質(zhì)量流式實驗的質(zhì)控標(biāo)配。

Elabscience® STYX™紅色固定化細(xì)胞活力檢測試劑盒（貨號：E-CK-A170） 提供了一種膜不通透、胺反應(yīng)性的紅色熒光染料，能夠精準(zhǔn)區(qū)分活/死細(xì)胞，且染色結(jié)果在固定、破膜及凍存后保持不變。其光譜特性專為PerCP檢測通道設(shè)計，是構(gòu)建多色流式方案（尤其是包含F(xiàn)ITC、PE等常見熒光素）的理想死細(xì)胞排除工具。

技術(shù)原理：共價結(jié)合，死細(xì)胞信號顯著增強

STYX™紅色固定化細(xì)胞活力檢測試劑盒 屬于小分子胺反應(yīng)性染料，無法穿透完整的細(xì)胞膜：

• 活細(xì)胞：染料僅能標(biāo)記膜表面游離胺基，熒光強度較低。

• 死細(xì)胞/凋亡細(xì)胞：膜完整性破壞，染料進入胞內(nèi)與大量蛋白質(zhì)胺基共價結(jié)合，熒光強度較活細(xì)胞提升數(shù)倍至數(shù)十倍，在流式散點圖上形成清晰分離的陽性群體。

該結(jié)合為不可逆共價鍵，因此后續(xù)的固定、破膜及凍存操作不會導(dǎo)致染料脫落，保證了活力門控的長期穩(wěn)定性。

核心優(yōu)勢：固定/破膜前后信號高度一致

根據(jù)產(chǎn)品驗證數(shù)據(jù)（見結(jié)果圖），將熱滅活與活C57BL/6小鼠脾細(xì)胞按1:1混合，經(jīng)STYX™ Red染色后，一部分直接上機（藍色峰），另一部分使用固定/破膜緩沖液處理后上機（紅色峰）。結(jié)果顯示：

• 固定/破膜前后，死細(xì)胞的強陽性峰和活細(xì)胞的弱陽性峰幾乎wan全重疊，熒光分離度無顯著變化。

• 未染色細(xì)胞（黑色虛線峰）背景清晰，表明染料具有優(yōu)異的信噪比。

這一特性使得研究者可以靈活安排染色流程——既可在表面染色時加入，也可在固定破膜后（或細(xì)胞凍存復(fù)蘇后）進行活力染色，無需擔(dān)心后續(xù)處理削弱分辨能力。

光譜參數(shù)與儀器兼容性

STYX™ Red的激發(fā)峰約為522 nm，發(fā)射峰約為652 nm，適用于配備PerCP通道（通常為488 nm激發(fā)，670 nm長通或690/50帶通接收）的流式細(xì)胞儀。其紅色發(fā)射光譜與FITC（530 nm）、PE（575 nm）、APC（660 nm） 等常用熒光素重疊極小，非常適合于≥6色的多色方案，尤其當(dāng)PerCP通道未被其他標(biāo)記占用時，可作為高效的死活排除通道。

產(chǎn)品規(guī)格與儲存條件

提供50 Tests、100 Tests及200 Tests三種規(guī)格，靈活匹配不同通量需求。請于 -20°C干燥避光條件下保存，有效期為12個月。運輸使用冰袋，確保染料活性。建議shou次解凍后分裝儲存，避免反復(fù)凍融。

推薦應(yīng)用場景

本試劑盒適用于小鼠、大鼠及人來源的各類單細(xì)胞懸液，包括：

• 外周血、脾臟、淋巴結(jié)及腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞

• 經(jīng)刺激培養(yǎng)后的T細(xì)胞、NK細(xì)胞

• 需要進行胞內(nèi)細(xì)胞因子（ICS） 或核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子（如Foxp3） 染色的樣本

• 凍存復(fù)蘇后的細(xì)胞活力評估在實驗設(shè)計中，可將STYX™ Red與表面抗體混合后一同加入細(xì)胞，孵育后洗滌，再進行后續(xù)固定破膜及胞內(nèi)染色。上機分析時，圈定STYX™ Red陰性（或弱陽性）的細(xì)胞群，即可有效排除死細(xì)胞對目標(biāo)信號的非特異性干擾。

如果您的流式方案已配置PerCP通道，且需要一種固定兼容、光譜潔凈的死活染料，Elabscience STYX™紅色固定化細(xì)胞活力檢測試劑盒將幫助您獲得更干凈、更可信的流式數(shù)據(jù)，讓每個陽性群體都反映真實的生物學(xué)狀態(tài)。