賽默飛lipornaimax說明書（貨號：13778075， 13778150）

一、兩款貨號規格區分

1. 13778075

規格：0.75 mL

適用：常規小批量RNAi實驗、實驗室日常siRNA敲低，適合中小型細胞篩庫

2. 13778150

規格：1.5 mL

適用：高通量篩選、多批次重復實驗、長期穩定使用，用量更大

賽默飛lipornaimax說明書：

適用：siRNA、miRNA、Stealth RNAi雙鏈；貨號13778075（0.75mL）/13778150（1.5mL）

一、前置準備與關鍵注意事項

1. 儲存：2–8℃冷藏，嚴禁凍存；使用前輕柔顛倒混勻，不可劇烈震蕩

2. 稀釋液：僅用無血清Opti-MEM I，不能加血清、雙抗

3. 細胞培養基：轉染全程培養基不加抗生素（抗生素會升高細胞毒性）

4. 孵育條件：復合物室溫靜置10–20min，不可超過30min，避免復合物失效

5. 無需換液：加完復合物直接放回培養箱，24–72h收樣，中途不用換液

二、各孔板標準配比（推薦，終濃度10nM siRNA）

培養板 鋪板培養基 siRNA用量 RNAiMAX用量 Opti-MEM總稀釋體積 轉染時匯合度

96孔板 100μL 1pmol 0.3μL 2×10μL 30%–50%

24孔板 500μL 6pmol 1μL 2×50μL 30%–50%

6孔板 2.5mL 30pmol 5μL 2×250μL 30%–50%

三、正向轉染（常規方案，貼壁細胞）

步驟1：鋪細胞（轉染前1天）

1. 無抗生素培養基鋪細胞，轉染當天匯合度30%–50%

2. 6孔板：每孔鋪1×10?個細胞，2.5mL無抗培養基

步驟2：配制siRNA稀釋液（A液）

以6孔板單孔為例：

1. 取250μL Opti-MEM，加入30pmol siRNA，輕柔吹打混勻

步驟3：配制轉染試劑稀釋液（B液）

1. 另取250μL Opti-MEM，加入5μL RNAiMAX，輕柔混勻

步驟4：制備轉染復合物

1. 將B液全部加入A液，輕輕顛倒混勻，室溫靜置10–20min

步驟5：加復合物轉染

1. 把500μL混合復合物直接滴入6孔細胞中，輕輕晃板混勻

2. 37℃、5%CO?培養箱靜置培養

3. 24–48h可檢測基因敲低；72h適合蛋白水平檢測

四、反向轉染（高通量篩庫、難轉染細胞如HepG2、MCF-7）

優勢：當天鋪細胞當天轉染，節省操作時間

1. 孔內先加稀釋好的siRNA+RNAiMAX復合物，室溫靜置15min

2. 細胞消化計數，細胞量為正向轉染2.5倍，用無抗培養基重懸后直接加入含復合物的孔中

3. 正常孵育，無需換液

五、特殊細胞優化方案

1. 原代細胞/巨噬細胞（NR8383）

siRNA用量不變，RNAiMAX提升20%–30%，復合物孵育20min；降低細胞鋪板密度，減少毒性

2. 懸浮細胞

采用反向轉染，轉染后24h半量換液，降低脂質體毒性

3. 共轉染siRNA+少量質粒DNA

先單獨配siRNA復合物、質粒+Lip3000復合物，分別孵育后混合再加入細胞，不建議單用RNAiMAX轉質粒

六、常見問題與操作禁忌

1. 敲低效率低

• 復合物靜置超時、培養基加了雙抗、細胞密度過高/過低

• 優化：siRNA終濃度上調至20–30nM，試劑用量增加20%

2. 細胞大量死亡

• RNAiMAX過量、siRNA濃度過高、使用含抗生素培養基

• 優化：降低試劑用量，轉染24h后更換新鮮培養基

3. 禁止操作

• 用PBS、普通培養基稀釋試劑；復合物劇烈震蕩；凍存轉染試劑

4. 有效期：未開封2年，開封后4℃可穩定使用6個月

七、Cas9 RNP轉染簡易適配（拓展用法）

1. sgRNA+Cas9蛋白先用Opti-MEM混合孵育10min形成RNP

2. RNP稀釋液再與稀釋后的RNAiMAX混合，室溫20min成復合物，后續步驟同正向轉染

公司常備現貨產品目錄：

Millipore 發光液

WBKLS0100 100ml

WBKLS0500 500ml  

Gibco B27

17504-044 10ml

12587010 10ml  

A1895601 10ml  

Gibco

雙抗 15140122-100ml

三抗  15240062-100ml

胰酶

25200056 100ml  

15400054  100ml

25300054  100ml

N-2添加劑

17502048 5ml  

胰島素

51300044 10ml  

41400045 10ml   

51500056 10ml  

L-谷氨酰胺  25030081-100ml

GlutaMAX  補充劑  35050061-100ml

MEM 非必需氨基酸溶液11140050-100ml

Trizol

15596026CN 100ml   

15596018CN 200m   

TRIzol LS

10296010CN 100ml  

10296028CN 200ml