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細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)屬于細(xì)胞工程范疇，細(xì)胞工程包括細(xì)胞融合技術(shù)、單克隆抗體的制備、核移植技術(shù)（克隆）等,而這些技術(shù)中都有細(xì)胞培養(yǎng)過程,所以說細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)研究的zui基本技術(shù)之一。

上海慧穎生物供應(yīng)RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞，進(jìn)口胎牛血清培養(yǎng)，活性好、存活率高。隨著細(xì)胞生物學(xué)尤其是干細(xì)胞研究的快速發(fā)展，在細(xì)胞治療領(lǐng)域已經(jīng)進(jìn)行了大量的探索，取得了一系列的令人振奮的成果，且部分基礎(chǔ)研究成果已經(jīng)在心血管系統(tǒng)疾病 、神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼相關(guān)疾病、糖尿病等。

養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)分享：

1.細(xì)胞形態(tài)觀察。細(xì)胞膜是每天必須觀察的，看是否清晰，細(xì)胞的死亡往往是從細(xì)胞膜的破裂開始的，早期的表現(xiàn)就是細(xì)胞膜某一點(diǎn)出現(xiàn)欠完整或者毛發(fā)影。

2.細(xì)胞往往會有“抱團(tuán)”現(xiàn)象，抱團(tuán)生長或死亡，個人認(rèn)為應(yīng)該勤換液或傳代，盡量避 免細(xì)胞抱團(tuán)。

3.細(xì)胞生長迅速，強(qiáng)烈建議用較大的培養(yǎng)瓶養(yǎng)，用小瓶養(yǎng)的話，換液不及時，很容易死 亡。細(xì)胞的生長速度一般為2天左右就需要傳代，并且一般為一傳三，或一傳四。

4.培養(yǎng)液：1640|DMEM|MEM|IMDM|a-MEM培養(yǎng)液，1L一般加碳酸氫鈉2g，并加雙抗，胎牛血清濃度*為12%，zui低不低于10%，有些細(xì)胞對胎牛血清高度依賴，比如WRO細(xì)胞，HT-22細(xì)胞，HA-VSMC細(xì)胞，NK-92細(xì)胞等。培養(yǎng)液PH應(yīng)調(diào)為7.20-7.40之間。

5.防污染。L-02細(xì)胞生長迅速，較少發(fā)生污染，但常規(guī)措施應(yīng)該做好。比如無菌操作，酒精 消毒等，培養(yǎng)瓶口建議過火，包括瓶蓋，應(yīng)過火4秒左右。

6.凍存。-20一小時，-80次夜，液氮長期保存。強(qiáng)烈建議液氮長期保存，盡量不要在-80長期 保存，死亡率很高。

7.復(fù)蘇。調(diào)節(jié)水浴箱溫度為42℃，并提前在試管內(nèi)放置10倍培養(yǎng)液，使培養(yǎng)液溫度與室溫一 致。1分鐘內(nèi)融化細(xì)胞(禁止搖晃凍存管)，移取至試管內(nèi)，動作要輕，從試管管底開始慢慢上提 移液管，使細(xì)胞在培養(yǎng)液內(nèi)分布均勻，離心，洗2次。

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其它經(jīng)驗(yàn)概括：

細(xì)胞類型 編輯 細(xì)胞類型根據(jù)是否附于支持物上生長的特性，分為 貼附型、懸浮型。 貼附型 細(xì)胞貼附在支持物表面生長，只依賴貼附才能生長的細(xì)胞叫做貼附型細(xì)胞(Anchorrage-dependent cells)這種現(xiàn)象與細(xì)胞分化有關(guān)。 貼附型細(xì)胞的分型 1.成纖維型細(xì)胞：(fibroblast) 來自中胚層 特點(diǎn)：與體內(nèi)成纖維細(xì)胞形態(tài)相似,胞體梭型或不規(guī)則三角形,中央有圓形核,胞質(zhì)向外伸出2～3個長短不同的突起。細(xì)胞在生長時呈放射狀,漩渦或火焰狀走行。 起源：細(xì)胞來自中胚層間充質(zhì)組織。 除真正的成纖維細(xì)胞、心肌、平滑肌、成骨細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞。 注意：細(xì)胞在培養(yǎng)時成為成纖維型細(xì)胞是一種慣稱,與體內(nèi)細(xì)胞不同。 2.上皮型細(xì)胞(epithlium cell type) 來自外胚層。 特點(diǎn)：扁平不規(guī)則多角型、圓形核、細(xì)胞緊密相連成細(xì)胞增殖數(shù)目增多時,整個上皮膜隨之移動。邊緣細(xì)胞很少脫離細(xì)胞群而單獨(dú)活動“ 拉網(wǎng)”現(xiàn)象與起源內(nèi)外胚層組織有關(guān)。 組織: 皮膚表皮及其衍生物(汗腺、皮脂腺)消化道分上皮、肝、胰、肺泡上皮。 3. 游走型細(xì)胞(wandering cell type) 特點(diǎn)：在支持物上散在生長,不連接成片,胞質(zhì)伸出偽足或突起呈活躍的游走或變形運(yùn)動,速度快不規(guī)則, 密度大連接成片呈多角形不易與其他類型的細(xì)胞 區(qū)別。 4. 多形型細(xì)胞(polymorphic cell type) 特點(diǎn)： 無規(guī)律的形態(tài)，如神經(jīng)細(xì)胞。 懸浮型 特點(diǎn)： 不貼附在支持物生長，胞體圓形，在培養(yǎng)液中生長空間大，可長時間的生長，繁殖旺盛便于做細(xì)胞代謝研究。S180肉瘤、血液里的白細(xì)胞、K562、 HL－60。 分型的目的： 方便描述細(xì)胞在培養(yǎng)過程中的形態(tài)變化。培養(yǎng)條件好時，細(xì)胞相對穩(wěn)定，可反映出起源、正常異常的區(qū)別，作為判定細(xì)胞生物學(xué)性狀指標(biāo)。 強(qiáng)調(diào)：一般形態(tài)并不是一項可靠指標(biāo)要受各方面影響。 如：反復(fù)開關(guān)溫箱、溫度、C02的濃度、培養(yǎng)基變堿、支原體、pH值。細(xì)胞在接種時呈三角型狀態(tài)，經(jīng)培養(yǎng)一定時間后，細(xì)胞在傳代前已形成上皮型細(xì)胞。

KG-1a細(xì)胞，人急性骨髓白血病細(xì)胞      25T

MV4-11細(xì)胞，人急性白血病細(xì)胞    25T

HL-60細(xì)胞，人急性早幼粒白血病細(xì)胞    25T

U937細(xì)胞，人急性早幼粒白血病細(xì)胞     25T

MOLM-13細(xì)胞，人急性髓系白血病細(xì)胞    25T

MOLM-14細(xì)胞，人急性髓系白血病細(xì)胞    25T

K562細(xì)胞，人慢性髓系白血病細(xì)胞  25T

HL-60細(xì)胞，人急性早幼粒白血病細(xì)胞    25T

CCRF-CEM細(xì)胞，人急性淋巴細(xì)胞白血病T淋巴細(xì)胞  25T

HS 505.T細(xì)胞，慢性淋巴細(xì)胞白血病（CLL）細(xì)胞   25T