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如何定量低豐度目的基因的表達（含詳細解決方法）有時候，qPCR實驗會成為阻礙你課題順利開展的強勢攔路虎！看似簡單的基因表達量差異驗證，當遇到低豐富表達的基因時，也許就舉步維艱。模板獲取困難導致的RNA提取量少或RNA質量不佳，即使選蕞佳的試劑、篩選出良好的引物，也有可能qPCR定量得到的內參基因CT值在18-20個cycle，而目的基因在31-35個循環。遇到這種情況，你是怎么解決的呢？qPCR在低豐度表達基因定量中的局限性基因的豐度是指基因在基因組中的拷貝數。可分為高豐度，中等豐度和低豐度。低
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NGS測序技術近年來得到了巨大發展，2017年摩根大會上，Illumina重磅推出NovaSeq測序儀，NovaSeq可以2天產生2Tb數據，通量是10年前GenomeAnalyzer的2000倍。測序通量的大幅增加，意味著更多的樣本混合上機，這樣的話我們如何在茫茫數據中找到對應樣本匹配的數據呢？人們想到了一種在文庫構建時在接頭上添加“接頭暗號”的方法，在測序完成之后根據“接頭暗號”對樣本進行分離。這里的接頭暗號就是樣本標簽“Index/Barcode”。本文將以建庫過程中要添加的接頭為核心，對
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dsDNA HS Assay Kit for Qubit®數據測評
行走江湖靠的就是實力dsDNAHSAssayKitforQubit®數據測評——簡便、靈敏、準確、穩定dsDNAAssayKitforQubit®是Yeasen生物開發的專門用于Qubit®熒光儀或熒光酶標儀的試劑盒，線性范圍0.2-100ng，即使在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，也可以選擇性的檢測dsDNA，且耐受較高濃度的蛋白質、鹽類、洗滌劑等污染物。產品名稱產品編號規格儲存dsDNAHSAssayKitforQubit®12640ES60100T2-8℃dsDNAHSAssa -
文獻 | Molecular Plant: 解密水稻半矮桿與應用之謎
文獻|MolecularPlant:解密水稻半矮桿與應用之謎倒伏是影響水稻高產穩產的主要限制因素之一。自20世紀60年代以來，以作物矮化育種為標志的“綠色革命”主要是利用赤霉素合成基因SD1的突變體，培育半矮稈性狀，提高作物（水稻）的抗倒伏能力，使水稻產量得到了大面積的顯著增加。經過多年研究，雖然在水稻中發現了超過60個基因可以導致半矮稈性狀，但這些基因除影響莖稈長度還影響其它農藝性狀，難以應用于培育抗倒伏品種。目前，SD1的突變仍然是培育水稻半矮稈性狀的主要基因。由于單一的可用基因，抗倒伏性狀 -
作為DNA分選磁珠的生產廠商，我們zui經常被客戶問到的問題就是：高通量測序（NGS）文庫制備時，DNA磁珠為什么可以用來純化和分選文庫？在這里我們整理相關的資料，對這個問題做簡單的闡述。分選磁珠的作用原理是基于一種固相載體可逆化固定（SPRI）的分離純化方法。磁珠體系中一般包含：磁珠、DNA、聚乙二醇（PEG）、以及鹽離子等，在一定濃度的PEG和鹽離子環境中，DNA可吸附到羧基修飾的高分子磁珠表面（即固相載體），該過程是可逆的，在適當條件下，結合的DNA分子可以被洗脫回收。納米級別的磁珠表面性
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一、WesternBlot實驗原理蛋白免疫印跡（WesternBlot，WB）是將蛋白質經電泳分離后轉移到膜上，然后利用抗體進行檢測的技術。完整的WB流程，如下圖所示，包含樣本制備、SDS-PAGE、轉膜、抗體結合、蛋白檢測等5個大步驟。二、試劑準備詳見文末附錄。三、實驗步驟1.樣本制備1）融解RIPA裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的zui終濃度為1mM。2）貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔加入150-250μ
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1.什么是RIPA裂解液？RIPA裂解液（RadioImmunoprecipitationAssayLysisbuffer，放射免疫沉淀法裂解緩沖液）是一種傳統的可用于裂解細胞或組織的快速裂解液，其原理為利用表面活性劑等裂解細胞膜（包括核膜），從組織或細胞中抽取可溶性蛋白。RIPA裂解液裂解后得到的蛋白一般可直接用于常規的WB、IP、co-IP等實驗。2.RIPA裂解液里有什么？RIPA裂解液的配制方法有很多種，主要包括裂解成分、蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑三種組分。裂解成分可通過破壞細胞膜和蛋白
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BenzonaseNuclease高活力核酸酶——消滅核酸，拒絕污染1.前言核酸污染是生物樣本制備中常常遇到的問題。在蛋白純化的過程中，如果您提取的蛋白粘度很高、蛋白純化的得率很低、蛋白檢測的結果很差，那么您的樣本可能遭受了核酸污染。如何去除核酸？超聲法和DNase/RNase酶法是常用的方法，但存在諸多缺陷（表1）。表1核酸去除，超聲法與DNase/RNase酶法優缺點超聲法DNase/RNase酶法優點利用剪切力可在一定程度上降解核酸利用核酸內切酶活性，可在溫和條件下，較好的消化核酸缺點僅能
