產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
   
    動(dòng)物或植物細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激(oxidative stress) 時(shí)，會(huì)發(fā)生脂質(zhì)氧化。丙二醛(Malondialdehyde,MDA)是一種生物體脂質(zhì)氧化的天然產(chǎn)物，一些脂肪酸氧化后逐漸分解 為一系列包括MDA在內(nèi)的復(fù)雜化合物，此時(shí)通過(guò)檢測(cè)MDA的水平即可檢測(cè)脂質(zhì)氧化的水平，因此MDA的測(cè)定被廣泛用作脂質(zhì)氧化的指標(biāo)。生物體內(nèi)的一些其它生化反應(yīng)也會(huì)產(chǎn)生MDA，例如thromboxane synthase也可以催化產(chǎn)生，但只要在測(cè)定時(shí)設(shè)置適當(dāng)對(duì)照即可觀察到脂質(zhì)氧化水平的變化。 

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、植物根莖、葉子等

2、剪刀、離心管、小試管或96孔板、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、水浴鍋或恒溫箱、離心機(jī)

操作步驟(僅供參考)：

1、樣本處理：

①制備MDA提取液：取適量的植物根、莖、葉子、種子等，稱量后剪碎，按每0.4g植物樣品加入4ml的比例加入組織勻漿液，充分勻漿(一般取0.4～1g植物樣品即可)。

4000g 離心10min，取上清液待用，該上清液即為 MDA 提取液；如果采用酶標(biāo)儀檢測(cè)結(jié)果，應(yīng)相應(yīng)減少制備提取液的量，譬如取0.2g植物樣品加入2ml組織勻漿液。

②樣品準(zhǔn)備完畢后可以用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定蛋白濃度，以便于后續(xù)計(jì)算單位蛋白重量植物樣品的MDA含量；測(cè)定蛋白濃度非必須步驟，亦可采用經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算。

③該試劑盒對(duì)于樣品中的常見(jiàn)化學(xué)成分的兼容性參考下表：

2、配制TBA工作液：稱取適量TBA，用組織勻漿液配制成濃度為0.68％的TBA工作液， 例如取0.068g TBA 用10ml組織勻漿液配制，最終濃度即為0.68%的TBA工作液。TBA工作液需溶解后再使用，可以加熱到60℃促溶，并可通過(guò)反復(fù)劇烈Vortex促溶；配制好的TBA工作液 4℃避光保存，至少1個(gè)月內(nèi)有效。

3、稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：如果進(jìn)行簡(jiǎn)易快速檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品直接稀釋至10μM；如果進(jìn)行精確檢測(cè)， 取適量標(biāo)準(zhǔn)品用組織勻漿液稀釋至1、2、5、10、20、50μM；如果采用經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算含量，無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品；配制好的MDA標(biāo)準(zhǔn)品4℃避光保存，至少3個(gè)月內(nèi)有效。

計(jì)算：

如果進(jìn)行簡(jiǎn)易快速檢測(cè)，直接以10μM標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行計(jì)算，獲得MDA的摩爾濃度；如果采用經(jīng)驗(yàn)公式，無(wú)需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線或測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)品；如果需要精確計(jì)算，以MDA標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算處MDA提取液的濃度；對(duì)于固體狀組織，可以通過(guò)單位重量的蛋白含量或組織重量等來(lái)表示最初樣品中的MDA含量，例如μmol/mg蛋白或μmol/mg組織。

簡(jiǎn)易快速MDA含量計(jì)算公式：

MDA 含量(μmol/mg)=(A測(cè)定-A空白)/(A標(biāo)準(zhǔn)-A空白)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度/蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度(mg/ml)

式中：A測(cè)定=待測(cè)樣品的 532nm 處吸光度

A標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)品的  532nm  處吸光度

A空白=空白對(duì)照的 532nm 處吸光度

標(biāo)準(zhǔn)品濃度=10μM

蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度(mg/ml)=BCA 法測(cè)定的蛋白濃度(mg/ml)

不采用標(biāo)準(zhǔn)品的經(jīng)驗(yàn)公式：

MDA 濃度(μmol/L)=6.45×(A532-A600)-0.56×A450

MDA 含量(μmol/mg)=MDA濃度(μmol/L)×MDA提取液體積(ml)/植物組織鮮重(g)

式中：A532=待測(cè)樣品的532nm 處吸光度

A600=待測(cè)樣品的600nm 處吸光度

A450=待測(cè)樣品的450nm 處吸光度

注意事項(xiàng)：

1、 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。

2、 如果沒(méi)有分光光度計(jì)，也可以使用酶標(biāo)儀測(cè)定，檢測(cè)樣品量會(huì)相應(yīng)增加。

3、 待測(cè)樣品盡量新鮮，提取后應(yīng)盡快檢測(cè)，以免活性下降。

4、 待測(cè) MDA提取液如不能及時(shí)測(cè)定，應(yīng)置于-20℃保存，4天內(nèi)穩(wěn)定。

5、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

6、試劑開封后請(qǐng)盡快使用，以防影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)效果。

有效期：12個(gè)月有效。低溫運(yùn)輸，按要求保存。