主要用途

細胞/組織過氧化物體（peroxisome）粗提分離試劑是一種旨在從動物細胞或組織中分離出完整而純化的過氧化物體細胞器的而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和培養細胞的過氧化物體的制備。其制備物產量高，可以被用于脂質β-氧化、氨基酸代謝、糖脂和膽汁酸生物合成、蛋白組學和病理生理學等的研究。產品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能穩定，分離產量和純度堪稱同類產品。

保存方式

保存凈化液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保證6月

用戶自備

HANK平衡鹽緩沖溶液（GMS12028）或PBS緩沖溶液（GMS12033）：用于清理細胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于細胞脫離

細胞培養液（GMS12052）：用于細胞處理所需的培養基

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

50毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于樣品操作的容器

4℃臺式離心機：用于樣品操作

4℃超速離心機：用于樣品操作

DOUNCE勻漿器：用于裂解細胞

實驗步驟

一、 動物軟組織過氧化物體分離（組織勻漿法）

實驗開始前，將－20℃冰箱里的凈化液（Reagent C）取出凍融，然后移出xx毫升凈化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標記為裂解工作液，放進冰槽里備用。然后進行下列操作。

1． 手術取出動物組織，并秤重以確定1克組織重量（實驗前使動物空腹12至24小時）

2． （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管

3． （選擇步驟）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4． 即刻用刀片切碎組織

5． 放進一個預冷的15毫升錐形離心管

6． 加入xx毫升預冷的裂解工作液

7． 渦旋震蕩5秒，充分混勻

8． 即刻放入預冷的DOUNCE勻漿器

9． 在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約20至40下）（注意：參見注意事項8）

10． 將所有組織勻漿物移入15毫升錐形離心管

11． 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1000g

12． 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞

13． 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為3500g

14． 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管

15． 放進4℃超速離心機離心20分鐘，速度為25000g

16． 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得過氧化物體沉淀物

17． （選擇步驟）加入xx毫升預冷的保存液（Reagent E）

18． （選擇步驟）放進4℃超速離心機再次離心10分鐘，速度為25000g

19． （選擇步驟）小心抽去上清液

20． 加入xx毫升保存液（Reagent E），充分混勻

21． 即刻移入1.5毫升離心管，放進－70℃冰箱里

二、動物軟組織過氧化物體分離（化學處理法）

實驗開始前，將－20℃冰箱里的凈化液（Reagent C）取出凍融，然后移出xx毫升凈化液（Reagent C）和xx毫升的裂解液（Reagent B）到15毫升錐形離心管里，混勻后，標記為裂解工作液，放進冰槽里備用。然后進行下列操作。

1． 手術取出動物組織，并秤重以確定1克組織重量（實驗前好使動物空腹12至24小時）

2． （選擇步驟）放進預冷的50毫升錐形離心管

3． （選擇步驟）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4． 移入一個液氮凍存管

5． 即刻放入液氮罐過夜

6． 次日從液氮罐里取出，即刻（快速度）碾碎組織成粉末（注意：切莫使組織凍融）

7． 放進一個15毫升錐形離心管

8． 加入xx毫升預冷的裂解工作液

9． 渦旋震蕩5秒，充分混勻

10． 在冰槽里孵育2分鐘，期間渦旋震蕩5秒一次

11． 加入xx微升預冷的強化液（Reagent D）

12． 渦旋震蕩5秒，充分混勻

13． 在冰槽里孵育5分鐘，期間渦旋震蕩5秒二次（注意：參見注意事項9）

14． 加入xx毫升預冷的保存液（Reagent E），輕輕搖動試管混勻

15． 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為1500g

16． 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管——此步驟去除細胞核和未溶解的細胞

17． 放進4℃臺式離心機離心10分鐘，速度為3500g

18． 小心移出上清液到另一個新的預冷的15毫升錐形離心管

19． 放進4℃超速離心機離心20分鐘，速度為25000g

20． 小心抽去上清液，保留沉淀顆粒——此步驟獲得過氧化物體沉淀物

21． （選擇步驟）加入xx毫升預冷的保存液（Reagent E）

22． （選擇步驟）放進4℃超速離心機再次離心10分鐘，速度為25000g

23． （選擇步驟）小心抽去上清液

24． 加入xx毫升保存液（Reagent E），充分混勻

25． 即刻移入1.5毫升離心管，放進－70℃冰箱里

注意事項

1． 本產品為10次（1克動物組織或5 X 10⁷細胞）或50次（200毫克動物組織或1 X 10⁷細胞）操作

2． 實際操作的動物組織重量或細胞量與試劑使用量按比例調整：例如200毫克動物組織：試劑用量是標準用量的五分之一

3． 所有操作均須嚴格在4℃或以下狀態進行

4． 操作時，須戴手套

5． 操作時，須無菌操作，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent E）

6． 建議使用足夠的樣品量

7． 建議嚴格控制操作時間

8． 通常勻化次數為20至40下（或細胞顆粒群/組織塊狀消失為止）達到80％的細胞裂解為理想狀態，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升勻漿物的細胞裂解程度：完整細胞呈現發亮的圓環。低于50％可以增加勻化次數

9． 通常孵育5分鐘（不宜超過5分鐘）達到80％的細胞裂解為理想狀態，但不同的組織或細胞類型會存在差異。用戶可以通過顯微鏡觀察3微升裂解物的細胞裂解程度：完整細胞呈現發亮的圓環。低于50％可以增加孵育時間和渦旋震蕩次數

10． 可見離心后出現的液面頂端的白色脂肪漂浮層，使用吸管或槍頭小心吸掉

11． 對于難以裂解的細胞，例如HeLa細胞，采用物理勻漿法是優先推薦的技術處理

12． 通常1克動物組織或5 X 10⁷細胞的過氧化物體含量為1毫克以上過氧化物體蛋白

13． 如果需要獲得99％以上純度的過氧化物體，使用細胞/組織高質純化過氧化物體分離試劑盒－GMS10119.3 

14． 過氧化物體正常活性測定方法是： CTALASE、HYDROXYPYRUVATE REDUCTASE等

15． 本公司提供系列過氧化物體分析試劑產品

質量標準

1． 本產品經鑒定性能穩定

2． 本產品經鑒定分離的過氧化物體內外膜完整

3． 本產品經鑒定分離的過氧化物體維持正常活性

4． 本產品經鑒定不含污染性蛋白酶和核酶