賽默飛高分辨質譜(Orbitrap/Q Exactive 系列)做靶向物測試,核心是:樣品潔凈、濃度適配、溶劑兼容;質量精度、分辨率、離子源條件達標;用標準品校準、內標定量,數據滿足定性 + 定量雙重門檻。
一、樣品與靶向物基本要求
1. 靶向物信息(必須提供)
分子式 / 精確分子量(單同位素質量,用于質量數匹配)Thermo Fisher Scientific
結構式(確認離子化位點、碎片規律)
預期保留時間(LC 體系)或 沸點 / 熱穩定性(GC 體系)
離子化模式:ESI±、HESI±、APCI 等(優先提供)
2. 樣品濃度與基質
3. 溶劑兼容性(MS 級)
二、儀器與方法學關鍵參數(靶向測試)
1. 質量精度與分辨率(核心)
2. 離子源條件(以 HESI/ESI 為例)
源溫:ESI 250~350℃;HESI 300~400℃
噴霧電壓:正離子 +2.8~+3.5 kV;負離子 -2.5~-3.0 kV
鞘氣 / 輔助氣:N?(純度≥99.999%),鞘氣 30~50 arb,輔助氣 5~15 arb
3. 掃描模式(靶向)
PRM(平行反應監測):高靈敏、高特異,適合已知靶向物定量;需確定母離子→子離子對及碰撞能量(HCD)Thermo Fisher Scientific
Full Scan + 精確質量提取(XIC):適合多靶標同時篩查,提取窗口 ±5 ppmThermo Fisher Scientific
SIM(選擇離子監測):超痕量(pg/mL 級),但僅一級,無結構確證Thermo Fisher Scientific
三、定性與定量確證標準(必須滿足)
1. 定性(靶向物鑒定)
精確質量匹配:實測 m/z 與理論值偏差 ≤3 ppm(內標 ≤1 ppm)Thermo Fisher Scientific
同位素分布匹配:同位素峰形、豐度比與理論值相似度≥90%
二級碎片匹配:特征碎片離子(≥2 個)的 m/z 與標準品 / 數據庫一致,相對豐度比符合
保留時間匹配:與標準品 RT 偏差 ≤0.1 min(LC 體系)
2. 定量(靶向物含量)
校準曲線:r2≥0.995,5~7 個濃度點(含零點)
內標要求:優先同位素標記內標(如 13C/1?N),校正基質效應與儀器波動
精密度:RSD ≤15%(低濃度 ≤20%)
準確度:回收率 85%~115%(痕量 70%~130%)Thermo Fisher Scientific
四、送樣與操作禁忌
必須提供:靶向物標準品(≥1 mg)(用于校準、RT 確認、碎片庫建立)
禁止:
樣品保存:4℃冷藏(≤24 h)或 -20℃冷凍(長期),避免反復凍融
五、常見靶向物類型適配要點
小分子(農殘 / 獸藥 / 藥物):ESI±、PRM、分辨率 70k/17.5k,濃度 0.1~10 μg/mL
代謝物(生物樣本):HESI、Full Scan+XIC、內標定量,濃度 ng/mL~μg/mLThermo Fisher Scientific
多肽 / 蛋白:ESI+、分辨率 120k/35k、m/z 600~2000,濃度 1~5 μg/mLThermo Fisher Scientific