一、實驗前準備

組織樣本處理-所用全套試劑耗材

二、樣本取材及預處理

1、小鼠進行頸部脫臼處死后，用75%的酒精對小鼠表面進行消毒，打開腹腔通過左心室使用10 mL注射器向小鼠灌注10 mL預冷的1xPBS緩沖液（abs962）,取出大腦，將大腦放在含有1xPBS緩沖液（abs962）的培養基中，清洗組織；
2、機械解離，用鋒利的眼科剪將其剪碎成5-1 mm3 的小塊。
 
三、組織解離步驟
（一）組織消化解離

1、酶消化：將組織塊（約100-200mg）轉移至離心管，放入裝有1 mL解離液的5 mL圓底試管中，37℃恒溫培養箱中靜置消化60 min，每隔10分鐘上下顛倒混勻試管；
2、搖床孵育：將離心管置于 37℃恒溫水平搖床，以 80-100 rpm 的轉速孵育 30-40分鐘。
3、70μm 細胞篩網過濾，預冷 1×PBS 3-5mL 沖洗篩網；隨后加入5 mL PBS溶液進行洗滌，4℃條件下以400 xg離心5分鐘，棄去上清液，用4 mL 36% Percoll重懸沉淀；
4、4℃、300g 離心 5min，棄上清，4mL 40% Percoll 重懸沉淀；
 
（二）Percoll密度梯度液配置（36%、100%）

100% Percoll溶液：
Percoll細胞分離液與PBS緩沖液(10×)按體積比9:1混合，配制等滲100% Percoll母液
36% Percoll溶液：
36% Percoll 溶液：用等滲Percoll 溶液與RPMI-1640 培養基按照體積比9:16混合，配置成36% 等滲Percoll 溶液
 
（三）Percoll 密度梯度提取目的細胞

1、隨后細胞懸液在室溫條件下以低加速度（加速度1）和無制動的情況下，以800 xg離心20分鐘，棄去上層磷脂和上清，沉淀用1xPBS緩沖液（abs962）重懸；
2、將細胞懸液在4℃條件下以400 xg離心5 min，棄去上清；
3、細胞沉淀用1x紅細胞裂解液（abs9101）重懸，室溫條件裂解5 min，隨后在4℃條件下以400 xg離心5 min，棄去上清；
4、細胞沉淀用適當的1xPBS緩沖液（abs962）重懸，4℃條件下以400 xg離心5min，棄去上清；
5、隨后細胞沉淀使用適當的1xPBS緩沖液（abs962）重懸，得到的細胞懸液可用于后續的實驗分析。
 
四、流式結果展示

小鼠腦組織單細胞懸液染色結果（abs50098）