背景：順鉑是臨床一線化療藥，但三大痛點長期限制療效：毒副作用強、腫瘤易耐藥；化療誘導腫瘤細胞膜PS（磷脂酰絲氨酸）外翻，催生強免疫抑制微環境。常規 LNP 很難同步包裹順鉑與核酸，單獨敲低 Xkr8 或表達 ANX5 也只能微弱緩解 PS 暴露。

南方醫科大學聯合新加坡國立大學團隊在ACS Nano發表創新工作：將四價鉑前藥做成 LNP 輔助脂質，構建 PtLNP 一體化遞送系統，共遞送 Xkr8 siRNA 與 ANX5 mRNA，雙通路阻斷 PS 外翻，大幅提升化療 - 免疫聯合治療效果。

一、核心創新設計

化學改造：Pt (II) 順鉑氧化為 Pt (IV)，酯化合成 5 種脂質鉑前藥，篩選 Lipid-Pt?摻入經典 FDA LNP 骨架；

雙功能載體：Pt 脂質既是化療藥物儲存單元，又能提升 LNP 剛性、增強 mRNA/siRNA 遞送效率；

雙核酸協同策略：

• siXkr8：沉默 scramblase Xkr8，從源頭減少 PS 外翻；

• ANX5 mRNA：胞內表達 ANX5 蛋白，結合并遮蔽已經外翻的 PS，阻斷免疫抑制信號。

二、實驗結果（對應原文圖表）

1. PtLNP 理化特性、核酸遞送與釋藥性能｜圖 1

 20% Lipid-Pt?配方 PtLNP 粒徑 116.5 nm，PDI 僅 0.09，核酸包封率＞98%，鉑元素在納米粒內均勻分布；

血清穩定性大幅提升：游離 mRNA 極易降解，普通 LNPs 僅穩定 12 h，PtLNP 可保護 mRNA 長達 36 h；

GSH 響應可控釋鉑：生理 PBS 中穩定，模擬腫瘤高 GSH 環境 72 h 累計釋放 60.8% 鉑；給藥前期 mRNA 優先表達，36 h 后鉑大量釋放殺傷腫瘤，時序匹配；

多腫瘤細胞（4T1、SKOV3、A549 等）轉染效率提升 12.5%~42.3%，24 h 內無明顯細胞毒性。

圖1、將Pt(IV)前藥整合到脂質納米顆粒（LNPs）中以實現RNA遞送

2. PtLNP 提升細胞攝取與溶酶體逃逸機制

• 摻入 Lipid-Pt?提高納米粒機械剛性，單顆粒追蹤證實 PtLNP 細胞內化速度顯著優于普通 LNPs；

• 僅 0.5 h 即可實現高效溶酶體逃逸，Cy5 標記 mRNA 胞內蓄積量顯著更高；

• 更高剛性穩定內體中顆粒形態，促進核酸釋放至細胞質，從材料力學層面解釋轉染增效機理。

圖2、PtLNPs通過調控細胞遞送過程，增強了mRNA的轉染效率。

3. 體外共遞送體系抑制 PS 外翻、重塑免疫細胞｜圖 3

• mRNA/siRNA 質量比 8:2 為較優配比，顯著降低凋亡腫瘤細胞、凋亡小體表面 PS 暴露；

• 游離順鉑會引發巨噬細胞過度吞噬凋亡細胞，大量分泌 TGF-β、IL-10 抑炎因子；雙核酸 PtLNP 可逆轉該現象，上調 TNF、IL-1β、IL-6 促炎抗腫瘤因子；

• Transwell 共培養證明：低 PS 凋亡小體減少巨噬細胞吞噬，更多被樹突狀細胞（BMDC）攝取，DC 成熟標志物 CD80/CD86 表達上調，啟動適應性抗腫瘤免疫。

圖3、整合mANX5/siXkr8的PtLNPs在體外誘導適應性免疫反應。

4. 體內腫瘤基因調控，改善腫瘤免疫微環境｜圖 4

瘤內注射 PtLNP 可有效沉默腫瘤 Xkr8 基因，同時高效表達 ANX5 蛋白，腫瘤組織 PS 暴露明顯減少；

腫瘤微環境全面優化：TGF-β、IL-10 下調，IFN-γ、TNF、IL-12 等抗腫瘤免疫因子升高；M1 型抗腫瘤巨噬細胞增多，免疫抑制 MDSC 減少，瘤內 CD8?殺傷 T 細胞浸潤顯著增加；

轉錄組測序證實，該體系激活抗原呈遞、T 細胞受體、TNF 等多條抗腫瘤免疫通路。

圖4、共載 siXkr8/mANX5 的 PtLNPs 在體內誘導轉染并增強適應性免疫應答。

5. 體內抑瘤、抗轉移與長效免疫療效｜圖 5

原發瘤模型：游離順鉑短期抑瘤后快速復發，siXkr8/mANX5 PtLNP 持續抑制腫瘤，部分小鼠實現腫瘤消退；小鼠體重無明顯下降，主要臟器無病理損傷，安全性良好；

對側遠端瘤：僅單側瘤內給藥，即可顯著抑制另一側未注射腫瘤生長，證實誘導全身系統性抗腫瘤免疫；

肺轉移模型：大幅減少肺部轉移結節，顯著延長荷瘤小鼠生存期；

免疫記憶：引流淋巴結成熟 DC 比例上升，脾臟效應記憶 T 細胞顯著增多，建立長效抗腫瘤免疫記憶，預防復發轉移。

圖5、siXkr8/mANX5 PtLNPs 的體內化學免疫治療。

三、研究總結

該工作跳出 “藥物 + 載體分開設計" 的傳統思路，直接將化療鉑藥改造為 LNP 輔助脂質，實現化療、siRNA、mRNA 三位一體共遞送，雙通路解決順鉑誘導的免疫抑制問題，為鉑類腫瘤化療免疫聯合治療提供全新可落地的納米遞送策略。

本研究中用于體外轉染、體內熒光成像驗證的 EGFP mRNA、OVA mRNA、Fluc 熒光素酶工具 mRNA，均采購自愛必信。高完整度、高表達活性的 IVT mRNA，為整套 LNP 核酸遞送功能驗證提供了穩定可靠的實驗支撐。

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