一、實驗前準備-全套試劑耗材

組織樣本處理-所用全套試劑耗材
二、樣本取材及預處理

1、對小鼠實施安樂,在皮毛線以上部位的基部截斷耳部;
2、在無菌培養皿表面放置耳組織,使用鑷子在組織上劃線去除多余毛發,用彎頭鑷子將耳組織沿背腹方向切開,分成2部分-背側和腹側。
3、將皮膚組織(100mg)加入含有解離液200μL的5mL離心管中,用細剪將皮膚組織切成極小碎片,直至形成糊狀物;
三、標準化組織解離步驟參考
1、組織消化解離

(1) 向離心管中再加入1.8mL組織解離液,渦旋混勻后放入水平搖床中,37℃,120轉/分鐘,消化90分鐘;
(2) 后向試管中加入40 μL的0.5MEDTA溶液(abs9133)終止消化,渦旋混合后繼續孵育10分鐘(37℃,120轉/分鐘);
(3) 消化完成后取出離心管,將濾液和破碎組織通過無菌70 μm 細胞篩過濾至新的50mL離心管中,并使用5mL的1xPBS緩沖液(abs962)沖洗裝過濾液的離心管并過濾,獲得細胞懸液;
(4) 將細胞懸液在4℃條件下,400×g離心5分鐘,棄去上清液。
(5) 使用適量1xPBS緩沖液(abs962)重懸細胞沉淀,可以用于后續分析。
四、流式結果展示

小鼠皮膚組織單細胞懸液染色結果(abs50227)
實驗所用試劑耗材
產品分類 | 產品編號 | 名稱 | 規格 |
組織消化解離 | abs50227 | 小鼠皮膚組織解離試劑盒 | 10T/25T |
篩網 | abs7232 | 70um細胞篩網(200目,白色,底面過濾) | 50個/箱 |
免疫細胞預富集 | abs9102 | percoll | 100ml |
10XPBS緩沖液 | abs961 | PBS緩沖液(10×) | 500ml |
1640培養基 | abs9484 | RPMI 1640培養基(含L-谷氨酰胺,不含HEPES) | 500ml |
紅細胞裂解液(1×) | abs9101 | RBC Lysis Buffer | 100ml |
阻斷FCR非特異性染色 | S0B0599 | Mouse FcR Blocking Reagent | 200T |
染色緩沖液 | abs9475 | Flow cytometry staining buffer | 500ml |
死活染料 | S0B88802 | Fixable Viability Dye 545 | 150μg |
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