XF Cell Mito Stress Test Kit（線粒體壓力測試）

線粒體壓力測試實驗通過依次加入線粒體電子傳遞鏈（ETC）的靶向藥物測量細胞的氧 氣消耗速率（OCR）而得到反映線粒體功能的關鍵參數，包括 basal respiration、ATP-linked respiration 、 proton  leak 、 maximal  respiration 、 spare  respiratory  capacity  和  non- mitochondrial oxygen consumption。

該實驗使用的藥物為 oligomycin 、FCCP 、rotenone/antimycin A，加入順序及 ETC 靶點 如附圖，以下為藥物的原理解釋：

Oligomycin：該藥物抑制 ATP 合酶（即復合物Ⅴ) ,  在測量細胞基礎呼吸后第一個加入，該 藥可以影響或降低通過 ETC 的電子流，引起線粒體呼吸或 OCR 減少，這部分減少的OCR 與 細胞 ATP 合成相關。

FCCP：該藥在 oligomycin 后加入，是一種解偶聯劑，加入該藥會破壞質子梯度和線粒體膜 電位，引起電子在 ETC 不受限制地傳遞，同時復合物Ⅳ的耗氧達到最大。FCCP 刺激的 OCR 可被用來計算細胞備用呼吸能力（該值為最大呼吸與基礎呼吸的差值），備用呼吸能力代表 細胞對能量需求增加或在壓力下作出反應的能力。

rotenone/antimycinA：第三次加入的藥物，是 rotenone 和 antimycin A 的混合物。Rotenone 是復合物Ⅰ的抑制劑，antimycin A 是復合物Ⅲ的抑制劑。這兩種藥物可關閉線粒體呼吸， 從而能夠計算出由線粒體之外活動所驅動的非線粒體呼吸耗氧。

basal respiration：用于滿足細胞的 ATP 需求和質子漏的耗氧。代表細胞在基礎狀態下的能 量需求。

ATP-linked respiration：加入 oligomycin 后產生的耗氧下降部分， 占基礎呼吸耗氧的一部 分，用于驅動 ATP 合成。代表線粒體滿足細胞能量需求的 ATP 合成能力。

proton leak：基礎呼吸減去 ATP 相關呼吸的剩余耗氧，該部分氧氣消耗未偶聯 ATP 合成。 質子漏可作為線粒體損傷的標志，也可被認為是調節線粒體 ATP 合成的一種機制。

maximal respiration：加入 FCCP 后獲得的細胞最大耗氧。FCCP 通過刺激細胞呼吸鏈以最 大能力工作，來模擬一種生理上的“能量需求"，這引起了底物（糖、脂肪、氨基酸）的快速 氧化以應對這種代謝挑戰。代表了細胞能夠實現的最大呼吸速率。

spare respiratory capacity：最大呼吸減去基礎呼吸的耗氧。代表細胞對能量需求的潛在響 應能力以及細胞基礎呼吸與理論呼吸最大值間的差距，細胞響應需求的能力可作為細胞適應 性或靈活性的指標。

non-mitochondrial oxygen consumption：  加入 rotenone 和 antimycin A 后仍持續的耗  氧，這是由一部分細胞酶繼續耗氧產生的。該參數