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切向流過(guò)濾是一種料液平行于濾膜表面循環(huán)流動(dòng),依靠跨膜壓差完成分子篩分,小分子、緩沖液透膜形成濾液,目標(biāo)大分子被截留回流儲(chǔ)液容器。持續(xù)橫向流體可沖刷膜面,大幅緩解膜堵塞與濃差極化,穩(wěn)定維持過(guò)濾通量,廣泛用于蛋白、核酸、抗體、外泌體的濃縮、緩沖液置換與樣品分級(jí),是生命科學(xué)、生物制藥實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)分離純化設(shè)備。傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室使用最多的是負(fù)壓驅(qū)動(dòng)的真空過(guò)濾裝置,是使用單張濾膜進(jìn)行截流的死端過(guò)濾,其組裝、使用、過(guò)濾方式,都和使用超濾膜包或中空纖維柱過(guò)濾的切向流裝置,有很大的不同。下面我們就介紹Tandil100切向流過(guò)濾裝置的具體使用方法。

1. 支撐座組裝
Tandil100實(shí)驗(yàn)室切向流過(guò)濾系統(tǒng)采用集成設(shè)計(jì),整合蠕動(dòng)泵、高精度雙壓力表、獨(dú)立電磁攪拌單元、500mL大容量PES濃縮瓶與全套標(biāo)準(zhǔn)化管路配件,在使用前可以根據(jù)使用的膜包不同,使用管路套件將其連接起來(lái)。首先使用配套六角扳手拆開(kāi)主機(jī)殼體固定螺絲,將支撐座鎖附至機(jī)身,調(diào)整支撐桿使加工平面朝向設(shè)備后方并鎖緊固定。

2. 壓力岐管模組裝配
先安裝下層進(jìn)液壓力岐管,將組件穿入支撐架底部,保證壓力表表頭朝前,擰緊后方手?jǐn)Q螺絲固定;把支架固定座卡入卡匣支撐架,套裝至支撐桿中段后鎖死;最后將上層回流壓力岐管安裝于支撐架頂部,同樣緊固后側(cè)螺絲。
3. 攪拌與濃縮瓶單元安裝
把超薄磁石攪拌器嵌入機(jī)身預(yù)留凹槽,攪拌器電源線接入主機(jī)后側(cè)專用輸出插座;在濃縮瓶瓶蓋預(yù)裝碟型濾器,將濃縮瓶平穩(wěn)放置在攪拌器上方,確保放置穩(wěn)固。
4. 三向閥裝配
取下濃縮瓶底部、下層進(jìn)液岐管前端、上層回流岐管左側(cè)的魯爾密封堵頭,分別在三處接口安裝三通換向閥,作為流路切換核心部件。
5. 全套管路裁切與裝配
依據(jù)工藝需求裁切不同規(guī)格硅膠管路,管路兩端預(yù)裝對(duì)應(yīng)魯爾轉(zhuǎn)接頭并用管夾固定。蠕動(dòng)泵循環(huán)管采用乳白色Pharmed材質(zhì),長(zhǎng)度50cm,兩端均裝配公魯爾轉(zhuǎn)1/8英寸接頭;回流、清潔管路選用半透明Ultra-C材質(zhì),長(zhǎng)度15cm,兩端雙接頭配置;濃縮管15cm、回收管20cm、排水管20cm、潤(rùn)洗管20cm均為單端公魯爾接頭,過(guò)濾管20cm為單端母魯爾接頭。全部管路裝配完成后,將調(diào)壓夾固定在濃縮管上,用于調(diào)節(jié)回流側(cè)壓力。
6.整機(jī)清潔流程
初次使用或?qū)嶒?yàn)結(jié)束后需完整循環(huán)清洗,使用清潔管連通上下兩組壓力岐管,向濃縮瓶倒入清潔液并蓋緊瓶蓋,調(diào)整全部三向閥至清潔循環(huán)流路;啟動(dòng)蠕動(dòng)泵緩慢提升轉(zhuǎn)速至50rpm,逐段檢查所有接頭、管路有無(wú)滲漏,出現(xiàn)漏液則擰緊魯爾接頭;保持系統(tǒng)循環(huán)15至30分鐘后停機(jī),完成整機(jī)流路清潔。清潔后的管路可拆下進(jìn)行高溫滅菌處理。
7. 廢液排出與樣品收集
停機(jī)狀態(tài)下調(diào)換三通閥流路,開(kāi)啟濃縮瓶瓶蓋單側(cè)氣密帽,依靠重力讓瓶?jī)?nèi)樣品沿回收管流入收集容器;如需回收管路內(nèi)殘留樣品,拆除過(guò)濾卡匣,用清潔管連通上下岐管,調(diào)整閥件后啟動(dòng)泵體循環(huán),將管路內(nèi)液體全部回收至濃縮瓶;再次切換瓶底三通閥,打開(kāi)氣密帽依靠重力排液,調(diào)整排水管流路,啟動(dòng)蠕動(dòng)泵借助泵力排空全部液體。
8.過(guò)濾卡匣潤(rùn)洗操作
分為單潤(rùn)洗卡匣、卡匣+系統(tǒng)同步潤(rùn)洗兩種模式。僅潤(rùn)洗膜卡匣時(shí),調(diào)整閥件使?jié)櫹垂苈穼?duì)接收集容器,濃縮瓶裝入潤(rùn)洗液,低速啟動(dòng)泵體逐步升壓至卡匣推薦操作壓力,持續(xù)循環(huán)潤(rùn)洗,潤(rùn)洗液用量遵循膜卡匣原廠說(shuō)明;同步潤(rùn)洗設(shè)備與卡匣時(shí),微調(diào)三通閥切換全循環(huán)流路,同步調(diào)節(jié)泵轉(zhuǎn)速與調(diào)壓夾,使進(jìn)液、回流壓力均匹配卡匣標(biāo)準(zhǔn)參數(shù),循環(huán)至瓶?jī)?nèi)剩余指定體積液體后停機(jī),按照廢液收集步驟排空潤(rùn)洗液。潤(rùn)洗前需預(yù)先完成卡匣基礎(chǔ)沖洗。
9.樣品預(yù)處理與濃縮實(shí)驗(yàn)
預(yù)處理階段,將緩沖液加入濃縮瓶,調(diào)整流路后低速啟泵,緩慢升壓至卡匣建議壓力,排盡管路內(nèi)部氣泡;待瓶?jī)?nèi)液體耗盡時(shí)停機(jī),拆下過(guò)濾管排空殘留液體后復(fù)原卡匣,完成實(shí)驗(yàn)前置預(yù)處理。濃縮操作時(shí)向濃縮瓶投入待處理樣品,啟動(dòng)泵體后同步調(diào)控轉(zhuǎn)速與調(diào)壓夾,嚴(yán)格控制回流壓力上限40psi,進(jìn)液壓力不超過(guò)卡匣額定限值;持續(xù)循環(huán)直至達(dá)到目標(biāo)濃縮倍數(shù),停機(jī)后回收全部樣品。
10.大體積樣品連續(xù)進(jìn)樣
Tandil100機(jī)型能夠處理較為寬泛的容量區(qū)間,當(dāng)待處理樣品總?cè)莘e超過(guò)濃縮瓶500mL容量時(shí),取一根硅膠管路,一端插接濃縮瓶上蓋預(yù)留插芯,另一端浸入外部樣品燒杯。過(guò)濾循環(huán)過(guò)程中濃縮瓶?jī)?nèi)部形成負(fù)壓,自動(dòng)持續(xù)吸入外部樣品,實(shí)現(xiàn)不間斷連續(xù)進(jìn)料,無(wú)需中途停機(jī)補(bǔ)料。
11.卡匣啟用沖洗
濃縮瓶裝入500mL超純水,泵體流速緩慢上調(diào),控制進(jìn)料壓力低于2bar(30psi);回流、濾液管路全部接入廢液容器,緩慢收緊調(diào)壓夾,使回流端、濾液端出水流速均等,兩端各排出250mL超純水即完成沖洗;低截留分子量卡匣過(guò)濾速率偏低,完整跑完500mL純水即可。沖洗結(jié)束后進(jìn)行初始水通量標(biāo)定,關(guān)閉回流管路,升壓至1bar(15psi),記錄10分鐘內(nèi)濾液排出體積作為基準(zhǔn)通量數(shù)據(jù)。
12.實(shí)驗(yàn)后標(biāo)準(zhǔn)化清洗
清洗液可選0.1~0.5N、0.1N硝酸、乙酸或磷酸,清洗液溫度控制30~45℃提升去污效果。先排空系統(tǒng)內(nèi)樣品廢液,使用超純水完整沖洗卡匣;再向瓶?jī)?nèi)加入500mL清洗液,打開(kāi)回流管路、關(guān)閉濾液端循環(huán)30分鐘,更換全新清洗液重復(fù)回流30分鐘;第三次更換清洗液后關(guān)閉回流,打開(kāi)濾液端排出250~300mL液體,完成深度清洗。清洗完成后復(fù)測(cè)水通量,計(jì)算膜恢復(fù)率;恢復(fù)率低于75%需重復(fù)整套清洗流程,低于50%則判定膜卡匣失效,建議更換新卡匣。
13.卡匣分周期保存規(guī)范
短期存放3天以內(nèi):卡匣內(nèi)部注滿滅菌純水密封;存放周期3天至6個(gè)月:填充0.05~0.1N溶液;存放超過(guò)6個(gè)月:使用15%甘油混合0.05%溶液浸潤(rùn)保存。無(wú)論保存時(shí)長(zhǎng),再次啟用前必須執(zhí)行完整的卡匣沖洗步驟。
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