產品概述

本產品為艾美捷Bethyl Laboratories推出用于定量檢測小鼠血清及血漿中免疫球蛋白G（IgG）濃度的夾心法ELISA試劑盒（貨號：E99-131）。試劑盒采用預包被96孔板、生物素化檢測抗體及鏈霉親和素-HRP（SA-HRP）顯色系統，檢測范圍為0.69 – 500 ng/ml，適用于小鼠IgG的精確定量分析。該試劑盒在小鼠免疫學、抗體藥代動力學、疫苗效價評估及自身免疫疾病模型研究中具有廣泛應用價值。

核心參數

參數 詳細信息

靶標 小鼠IgG（Mouse IgG）

反應種屬 小鼠

應用 ELISA

檢測范圍 0.69 – 500 ng/ml

樣本類型 血清、血漿

檢測方法 生物素化-鏈霉親和素-HRP

檢測類型 夾心法ELISA

保存條件 2 - 8 °C

有效期 收貨后6個月

試劑盒組分

組分 規格 數量

小鼠IgG預包被96孔板 96孔/板 1塊

小鼠IgG標準品 500 ng/瓶 2瓶

小鼠IgG檢測抗體 12 ml 1瓶

10X 稀釋緩沖液B 25 ml 1瓶

HRP溶液A 12 ml 1瓶

TMB底物液 12 ml 1瓶

終止液 12 ml 1瓶

20X 洗滌緩沖液 50 ml 1瓶

封板膜 — 6張

檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法（Sandwich ELISA）：

1. 包被：96孔板已預包被抗小鼠IgG捕獲抗體。

2. 加樣：將標準品或待測樣本加入孔中，樣本中的小鼠IgG與捕獲抗體結合。

3. 檢測：加入生物素化的小鼠IgG檢測抗體，形成“捕獲抗體-IgG-檢測抗體"夾心復合物。

4. 酶聯：加入鏈霉親和素標記的辣根過氧化物酶（HRP Solution A），與檢測抗體上的生物素特異性結合。

5. 顯色：加入TMB底物液，HRP催化底物產生藍色產物；加入終止液后顏色變為黃色。

6. 讀數：在450 nm波長處測定吸光度（OD值）。樣本中的IgG濃度與OD值呈正比，通過標準曲線計算得出。

操作流程要點

樣本準備

血清/血漿：按常規方法采集，避免溶血和反復凍融。建議適當稀釋后檢測（具體稀釋倍數需預實驗確定，一般血清樣本中IgG含量較高，需稀釋數萬倍）。

使用10X稀釋緩沖液B配制1X工作液，用于標準品和樣本的稀釋。稀釋緩沖液B含有蛋白穩定劑和防腐劑，可有效維持抗體在稀釋狀態下的穩定性。

洗滌液配制

將50 ml 20X洗滌緩沖液用去離子水或蒸餾水稀釋至1000 ml（即1:20稀釋），混勻備用。洗滌液中含有表面活性劑，可有效降低非特異性吸附。

標準曲線制備

標準品每瓶含500 ng小鼠IgG。加入適量1X稀釋緩沖液復溶，制備最高濃度標準品（500 ng/ml）。

進行倍比稀釋，建議制備至少7-8個標準點（如500、250、125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.90625、1.953125、0.9765625、0.69 ng/ml）。設置零孔（稀釋緩沖液空白）作為背景對照。

檢測步驟（簡述）

1. 將標準品和稀釋后的樣本加入預包被板孔中，每孔100 µl，覆蓋封板膜，在室溫或37°C孵育1-2小時（具體時間和溫度請參考試劑盒內說明書）。

2. 棄去孔內液體，每孔加入300 µl 1X洗滌液，洗板3-5次。每次洗滌后應充分拍干孔內殘留液體。

3. 加入檢測抗體（已稀釋至工作濃度），每孔100 µl，孵育30-60分鐘。

4. 洗板3-5次。

5. 加入HRP溶液A（已稀釋），每孔100 µl，孵育30分鐘。

6. 洗板3-5次。

7. 加入TMB底物液，每孔100 µl，避光孵育10-20分鐘，直至最高濃度標準品孔顯色達到深藍色、背景空對照孔無明顯藍色。

8. 加入終止液，每孔100 µl，輕拍混勻，藍色立即轉變為黃色。

9. 在30分鐘內，于450 nm波長處讀取OD值。若使用酶標儀的雙波長模式（450 nm減去570 nm或630 nm背景波長），可減少板底瑕疵干擾。

結果計算

以標準品濃度的對數值為橫坐標，對應的OD值（或經四參數擬合后的值）為縱坐標，繪制標準曲線。

將待測樣本的OD值代入標準曲線方程，計算出樣本中IgG的濃度，再乘以稀釋倍數即得原始樣本濃度。

使用注意事項

1. 樣本稀釋：正常小鼠血清中IgG濃度約為2-10 mg/ml，遠超試劑盒檢測上限（500 ng/ml）。建議先進行預實驗確定最佳稀釋倍數（通常需稀釋1:10,000至1:50,000倍）。血漿樣本同樣需高倍稀釋。建議使用試劑盒提供的稀釋緩沖液進行梯度稀釋。

2. 避免交叉污染：使用一次性吸頭，標準品和樣本按順序加樣。洗板時確保每次洗滌液加滿孔（300 µl）并充分吸干，不可出現干孔現象，否則會導致背景增高或孔間差異。

3. 顯色控制：TMB顯色時間需根據室溫及酶活性適當調整。室溫較低時顯色較慢，可適當延長至20-30分鐘；室溫較高時顯色迅速，需控制時間，避免最高濃度標準品孔出現“鉤狀效應"或顏色過深導致酶標儀讀數溢出。

4. 檢測波長：終止后的反應產物在450 nm處讀取OD值。若使用雙波長校正（450 nm減去570 nm或630 nm），可減少因板底瑕疵引起的誤差。

5. 有效期：試劑盒自收貨之日起2-8°C保存，有效期6個月。不同批次試劑組分不可混用，以確保批間一致性。

6. 標準品使用：標準品復溶后建議按單次使用量分裝保存于-20°C或-80°C，避免反復凍融導致蛋白降解。凍融次數不超過2次。

7. 防腐劑兼容性：部分樣本（如含疊d化鈉的保存血漿）可能影響HRP活性，需在實驗前通過透析或稀釋降低疊氮化物干擾。