產品概述

本產品為艾美捷Bethyl Laboratories推出的針對人源53BP1蛋白（p53 Binding Protein 1）的兔多克隆抗體，貨號A300-272A。抗體以未標記的完整IgG形式提供，適用于免疫組化（IHC）、免疫沉淀（IP）和蛋白質印跡（WB）應用。該抗體經抗原親和純化，特異性識別53BP1蛋白中部區域（第350-400位氨基酸殘基之間的表位），對人源和小鼠源53BP1均有反應性，可用于DNA損傷應答、細胞周期檢查點調控及相關信號通路研究。

核心參數

參數 詳細信息

靶標 53BP1（p53 Binding Protein 1）

反應種屬 人、小鼠

應用 IHC, IP, WB

宿主 兔

克隆性 多克隆

形式 完整IgG

免疫原區域 第350-400位氨基酸（參考序列NP_005648.1）

同型 IgG

偶聯物 未偶聯

純度 抗原親和純化

濃度 1000 µg/ml

保存條件 2 - 8 °C

有效期 收貨后1年

緩沖液 Tris-檸檬酸鹽/磷酸鹽緩沖液，pH 7-8，含0.09%疊d化鈉

制備與純化

本抗體采用固相固定化技術，使用特異性針對53BP1蛋白的表位進行親和純化。具體而言，識別表位定位于人源腫瘤蛋白p53結合蛋白1（53BP1）的第350至400位氨基酸區域（基于GeneID 7158，序列編號NP_005648.1）。免疫球蛋白濃度通過比爾定律測定，設定1 mg/mL IgG在A280波長的吸光度為1.4。

應用與推薦稀釋度

蛋白質印跡（Western Blot, WB）

推薦稀釋度：1:10,000 – 1:25,000

凝膠建議： 推薦使用3-8% Tris-乙酸鹽凝膠，以保證大分子量蛋白（約240 kDa）的有效分離和轉印。

操作規范：

所有WB實驗均使用5% Milk-TBST作為封閉液和抗體稀釋液

一抗孵育條件：過夜孵育

細胞裂解液的WB檢測：使用山羊抗兔IgG重鏈和輕鏈抗體（貨號A120-101P）

免疫沉淀物的WB檢測：使用HRP標記的抗兔IgG輕鏈抗體，并在封閉緩沖液中添加5%正常豬血清（貨號S100-020）

免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）

推薦用量：6 µg抗體 / mg裂解液蛋白

免疫組化（Immunohistochemistry, IHC）

推薦稀釋度：1:1000 – 1:5000

抗原修復： 對于福爾馬林固定、石蠟包埋（FFPE）組織切片，推薦使用檸檬酸緩沖液（pH 6.0）進行熱誘導抗原修復。

檢測系統： 建議使用基于HRP或熒光標記的檢測系統，配合適當封閉步驟降低背景。

產品特性說明

特異性與靈敏度

本抗體經親和純化，特異識別53BP1蛋白中部區域（第350-400位）。該表位位于蛋白的布里淵結構域（BRCT）重復區域之前，避免了與其它含BRCT結構域的蛋白（如BRCA1）的交叉反應。由于為多克隆抗體，可識別目標抗原上的多個表位，具有較高的檢測靈敏度，適用于低豐度蛋白的檢測。經驗證，抗體對人源和小鼠源53BP1均有良好的反應性，可用于跨物種實驗。

工作濃度優勢

WB推薦稀釋范圍寬（1:10,000-1:25,000），稀釋度高，抗體的稀釋液消耗少，經濟性好。IHC推薦性范圍為1:1000-1:5000，用戶可根據組織類型和固定條件靈活優化。IP推薦用量明確（6 µg/mg裂解液），降低了預實驗摸索的工作量。

儲存穩定性

在2-8°C條件下可穩定保存1年（自收貨之日起）。緩沖液中含0.09%疊d化鈉作為防腐劑，注意疊氮化物會抑制過氧化物酶活性，若計劃進行HRP偶聯二抗檢測，需在實驗前通過透析或脫鹽柱去除。

別名： 53BP1; p202; p53-binding protein 1; p53BP1; TDRD30; TP53-binding protein 1; tumor protein 53-binding protein 1; tumor suppressor p53-binding protein 1

使用注意事項

1. 疊氮化物干擾：緩沖液中含有0.09%疊d化鈉。若下游實驗使用HRP偶聯二抗進行檢測，需注意疊氮化物會抑制HRP活性。建議在進行WB或IHC前，通過PBS透析或使用脫鹽柱去除疊氮化物。

2. 抗體分裝：雖然產品在2-8°C條件下穩定，但若需長期保存或避免反復取用，可考慮分裝后保存于-20°C或-80°C。注意避免反復凍融，以免降低抗體活性。

3. 陽性對照建議：

WB：建議使用經電離輻射（如10 Gy γ射線）處理后的HeLa或293T細胞裂解液作為陽性對照，處理后可觀察到53BP1灶點相關蛋白條帶增強。

IHC：使用人扁桃體或睪丸組織作為陽性對照，這些組織中DNA復制和重組活躍，53BP1表達較高。

IF：雖然未經驗證，但基于多克隆抗體的特性，該抗體可能適用于免疫熒光，建議預實驗驗證。

4. 應用驗證范圍：本產品已在WB、IP和IHC應用中得到驗證，但不保證在其他應用（如免疫熒光、ChIP等）中的效果。如需拓展應用，建議自行進行預實驗優化條件。

5. 實驗參數優化：推薦的WB稀釋范圍（1:10,000-1:25,000）為高稀釋度起始參考。對于低表達樣本或組織裂解液，可適當降低稀釋倍數（如1:5,000-1:10,000）。IHC實驗中，抗原修復條件和抗體孵育時間需要根據組織類型進行優化。

6. 凝膠選擇：53BP1的分子量約為240 kDa，使用常規10% SDS-PAGE凝膠分離效果較差。建議使用3-8% Tris-乙酸酯梯度凝膠，并適當延長轉印時間（濕轉推薦100 V，2小時或4°C 30 V過夜）。